| 研究分担者 |
浦山 修 秋田大学, 医学部, 助教授 (90114743)
高田 五郎 秋田大学, 医学部, 教授 (40047254)
田中 俊誠 秋田大学, 医学部, 教授 (40002216)
小山 研二 秋田大学, 医学部, 教授 (80004638)
富田 靖 名古屋大学, 医学部, 教授 (70108512)
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| 研究概要 |
アポトーシスは、発生や分化の過程に関与し、免疫系や神経系の成立などに重要な役割を果たしている。また、抗癌剤や腫瘍壊死因子などが、癌細胞に対しアポトーシスを誘導すること、また、悪性度の高い腫瘍ではアポトーシスの頻度が少ないことが示唆され、臨床診断上、アポトーシス細胞を簡便に、感度良く検出するシステムの開発が急がれている。先に我々は、抗単鎖DNA抗体が、アポトーシス細胞を特異的に検出可能であることを報告した(1)。従来本抗体の調製は困難であったが、アルカリ変性DNAを免疫原に用いることで高力価のIgG抗体の調製に成功した。また本抗体によるアポトーシス細胞検出を分子レベルで証明するため、サンドイッチELISA法を用い、種々の核酸との反応性を比較検討した結果、単鎖DNAを特異的に認識することを明らかにした。また単鎖DNAの抗原決定基のサイズを解析するため、鎖長の異なる単鎖部位を3′末端に有する合成二本鎖DNAを用い、本抗体との結合をゲルシフトアッセイにより検討した結果、単鎖鎖長6以上のDNAと反応することが判明した。更に、アポトーシス細胞に特徴的なエンドヌクレアーゼの作用により形成されるオリゴヌクレオソームおよびそれから抽出して得たDNAラダーをWesternブロット法を用いて検出することが出来た。以上の結果より本抗体がアポトーシス細胞を簡便に検出するプローブとして有用であることが証明された。
(1)Naruse,I.,Keino,H.,and Kawarada,Y(1994)Histochemistry,101,73-78
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