| 研究課題/領域番号 |
08557043
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
神経内科学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
田代 邦雄 北海道大学, 医学部, 教授 (90002154)
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| 研究分担者 |
日比 望 株式会社エスアールエル研究部, 主席研究員
塚田 裕 株式会社エスアールエル研究部, 研究部長
森若 文雄 北海道大学, 医学部, 助教授 (30142722)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1998
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| キーワード | 神経筋疾患 / 筋酵素 / Carbonid anhydrase III / モノクローナル抗体 / 心筋梗塞 / Myoglobin / Myoglobin / CA-III |
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| 研究概要 |
血清筋酵素マーカーとしてCreatine Kinase(CK)、Aldolase、LDHなどが用いられてきたが、炭酸脱水水素酵素アイソザイムIII型(Carbonic anhydraseIII、以下CA-III)はCKと異なった筋疾患マーカーと考えられ、神経筋疾患における臨床的意義、モノクローナル抗体作成と測定系の確立、および従来検討されていない領域での臨床的応用の可能性を検討した。
健常者99名(男性52名、女性52名)と非神経筋疾患の110件の血清を対照とし、種々の神経筋疾患353件の血清を2ステップサンドイッチELISA系を用いCA-IIIの測定、検討した。健常者の血清CA-III濃度は対数正規分布を示し、95%信頼限界から正常上限は20ng/mlで、性別、年齢差では一定の傾向はみられず、非神経筋疾患の大多数は正常範囲内に分布した。神経筋疾患では進行性筋ジストロフィー、多発筋炎が高値を示し、遠位型ミオパチー、運動ニューロン疾患などで中等度の上昇がみられた。
モノクローナル抗体作製と測定系の確立は、継代培養したP3U1細胞から作成したハイブルドーマをエマルジョンにした抗原1mg/mlを皮下注したBALB/Cマウスの腹腔へ移植し、腹水液を採取した。移植腹水からIgG分画に精製し、15クローニングを得た。
精製モノクローナル抗体の大部分はIgG1であったが、一部はIgG2bであり、抗体価は2.9x10^3〜3.2x10^4であった。Sandwich ELISA系での標準的な測定法をモノクロナール抗体とポリクローナル抗体のペルオキシダーゼ標識の過ヨーソ酸法で検討し、モノクロナール抗体ではほぼ同程度の標準曲線が得られ、標識ポリクロナール抗体よりも測定感度が高いことが明らかにした。
神経筋疾患以外の領域では、心筋梗塞時のCA-IIIとミオグロビン量の比が有用であり、今後、さらに検討すべき課題と思われる。
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