家族性高コレステロール血症の遺伝子治療の開発

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08557062
• 応募区分: 試験
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 松沢 佑次 大阪大学, 医学部, 教授 (70116101)
• 研究分担者: 金田 安史 大阪大学, 細胞生体工学センター, 助教授 (10177537) ; 西田 誠 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 野崎 秀一 大阪大学, 医学部, 助手 (30252646) ; 山下 静也 大阪大学, 医学部・, 助手 (60243242)
• キーワード: 遺伝子導入 / 細胞融合 / リポゾーム / LDL受容体 / レトロウイルス / センダイウイルス

研究概要

第一に、遺伝子導入法の確立を行った。細胞融合能を持つHVJ(センダイウイルス)とDNAを核内に高率よく移行させる核蛋白HMG1とを組み合わせたリポゾームにマーカー遺伝子を封入し、ラットあるいはマウスに経門脈的または肝被膜下に投与することにより、約5〜10%の肝細胞において1〜2週間のマーカー遺伝子の発現が確認された。次に本法を利用してラット生体の肝臓にヒトLDL受容体遺伝子を導入したところ、約20%の血中コレステロールの低下を認め、ラット生体肝臓に対する本法によるLDL受容体遺伝子導入が可能であることが証明されたが、その発現はなお不十分であると考えられた。そこで我々は発現ベクターをpMy3からより小さく(7.5kb)、chicken β actin promotorを有するpCL1に変更することによって、遺伝子導入効率が著しく改善することを確認した。さらに発現ベクターとして従来米国においてex vivoの遺伝子治療に使用されていたレトロウイルスを使用し、上記の如く開発、確立したin vivo遺伝子導入システムを併用することによって非侵襲的かつ反復投与可能で高い発現効率を達成すると共に、従来分裂細胞に限定されたレトロウイルスによる遺伝子導入を静止期にある肝細胞への導入を可能にした。今後ヒトへと応用に向けてまずLDL受容体を欠損しているマウス及びラビットへ本法を用いてヒトLDL受容体遺伝子の導入を試みる予定である。

研究成果

• [文献書誌] T.Arai,Y.Matsuzawa,et al: "A novel nonsense mutation (G181X) in the human cholesteryl ester transfer protein gene in Japanese hyperalpherlipoproteinemic subject." J.Lipid Res.37. 2145-2154 (1996)
• [文献書誌] S.Yoshida,Y.Matsuzawa,et al: "Visceral fat accumulation and vascular complications associated with VMH lesioning of spontaneously non-insulin-dependent diabetic GK rat." Internat.J.Obesity. 21. 909-916 (1996)
• [文献書誌] A.Nakata,Y.Matsuzawa,et al: "Localization of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor (HB-EGF) in human coronary arteries" Circulation. 94. 2778-2786 (1996)
• [文献書誌] I.Shimomura,Y.Matsuzawa et al: "Enhanced expression of PAI-1 in visceral fat : possible contributor to vascular disease in obesity." Nature Med.2. 800-803 (1996)
• [文献書誌] I.Shimomura,Y.Matsuzawa,et al: "Rapid enhancement of acyl-CoA synthetase,LPL,and GLUT-4 mRNAs in adipose tissue of VMH rats." Am.J.Physiol.270. E955-E1002 (1996)
• [文献書誌] W.Chen Y.Matuszawa,et al: "Genetic analysis on a Japanese cerebrotendinous xanthomatosis family : identification of new mutation in adrenodoxin binding site of CYP27 gene." Biochim.Biophys.Acta. 1317. 119-126 (1996)