1996 年度実績報告書

環状ADPリボースの定量法の開発とその標的分子の探索

研究課題

研究課題/領域番号	08557129
応募区分	試験
研究機関	東京大学
研究代表者	堅田利明東京大学, 薬学部, 教授 (10088859)
研究分担者	星野真一東京大学, 薬学部, 助手 (40219168) 櫨木修東京大学, 薬学部, 助教授 (80142751)
キーワード	NAD / 環状ADPリボース / NADアーゼ反応 / ADPリボース環化反応 / ヒトリンパ球表面抗原CD38 / ラジオイムノアッセイ / シグナル伝達
研究概要	我々は先に、NAD^+を基質とした細菌毒素の触媒する三量体G蛋白質のADPリボシル化の研究を背景に、レチノイン酸によるHL-60細胞の好中球への分化過程にNAD^+分解酵素が誘導され、その酵素がリンパ球表面抗原のCD38分子によることを明らかにした。CD38はアメフラシの卵精巣より単離されたADPリボース環化酵素と構造上類似し、さらにその生成物である環状ADPリボースは、IP_3と同様にある細胞内プールからCa^<2+>を放出させる作用、あるいはその調節因子として機能することが期待されている。本研究では、環状ADPリボースの合成と分解に関わる基礎的な研究を展開すると共に、シグナル分子としての生理的役割を立証する一つの手段として環状ADPリボース量を高感度に測定する方法を開発し、以下の知見を得た。 1.NADアーゼ活性が優勢であるCD38は、“lyase"の特性を有するアメフラシの環状ADPリボース合成酵素とは異なるが、Zn^<2+>の結合あるいは低pH条件下では、CD38のNADアーゼ活性が抑制され、ADPリボース環化活性は逆に増大した。2.培養リンパ球系細胞においてCD38に対するある種のモノクローン抗体は、c-cbl癌遺伝子産物を含むいくつかの細胞蛋白質をチロシンリン酸化し、G蛋白質を介する活性酸素産生を増強した。3.本研究によって開発された環状ADPリボースのラジオイムノアッセイ系を用いて、いくつかの細胞の環状ADPリボース動態を解析した結果、ウニ卵の受精時に、細胞内Ca^<2+>の上昇に先行する環状ADPリボース含量の増加が認められた。また、リンパ球系細胞においては、CD38の発現誘導と相関して細胞内にその蓄積が観察された。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Kenji Kontani,et al.: "Tyrosine phosphorylation of the c-cbl proto-oncogene product mediated by cell surface antigen CD38 in HL-60 cells" J.Biol.Chem.271. 1534-1537 (1996)
[文献書誌] Miki Hara-Yokoyama,et al.: "Inhibition of NAD^+ glycohydrolase and ADP-ribosyl cyclase activites of leukocyte cell surface antigen CD38 by gangliosides" J.Biol.Chem.271. 12951-12955 (1996)
[文献書誌] Kenji Kontani,et al.: "Induction of CD38/NADase and its monoclonal antibody-induced tyrosine phosphorylation in human leukemia cell lines" Biochem.Biophys.Res.Commun.222. 466-471 (1996)
[文献書誌] Iwao Kukimoto,et al.: "Stimulation of ADP-ribosyl cyclase activity of the cell surface antigen CD38 by zinc ions resulting from inhibition of its NAD^+ glycohydrolase activity" Eur.J.Biochem.239. 177-182 (1996)
[文献書誌] Tsuyoshi Matsuo,et al.: "Association of phosphatidylinositol 3-kinase with the proto-oncogene product Cbl upon CD38 ligation by a specific monoclonal antibody in THP-1 cells" FEBS Lett.397. 113-116 (1996)
[文献書誌] Shin-ichi Hoshino,et al.: "Mapping of the catalytic and epitopic sites of human CD38/NADase to a functional domain in the carboxy terminus" J.Immunol.158. 741-747 (1997)
[文献書誌] 堅田利明,他: "最新内科学大系第2巻科学としての内科学(井村裕夫編)" 中山書店, 372 (1997)
[文献書誌] 堅田利明,他: "GTP結合蛋白質 (高井義美、堅田利明、成宮周編)" 羊土社, 312 (1997)

1996 年度 実績報告書

環状ADPリボースの定量法の開発とその標的分子の探索

研究代表者

堅田 利明 東京大学, 薬学部, 教授 (10088859)

研究成果

[文献書誌] Kenji Kontani,et al.: "Tyrosine phosphorylation of the c-cbl proto-oncogene product mediated by cell surface antigen CD38 in HL-60 cells" J.Biol.Chem.271. 1534-1537 (1996)

[文献書誌] Miki Hara-Yokoyama,et al.: "Inhibition of NAD^+ glycohydrolase and ADP-ribosyl cyclase activites of leukocyte cell surface antigen CD38 by gangliosides" J.Biol.Chem.271. 12951-12955 (1996)

[文献書誌] Kenji Kontani,et al.: "Induction of CD38/NADase and its monoclonal antibody-induced tyrosine phosphorylation in human leukemia cell lines" Biochem.Biophys.Res.Commun.222. 466-471 (1996)

[文献書誌] Iwao Kukimoto,et al.: "Stimulation of ADP-ribosyl cyclase activity of the cell surface antigen CD38 by zinc ions resulting from inhibition of its NAD^+ glycohydrolase activity" Eur.J.Biochem.239. 177-182 (1996)

[文献書誌] Tsuyoshi Matsuo,et al.: "Association of phosphatidylinositol 3-kinase with the proto-oncogene product Cbl upon CD38 ligation by a specific monoclonal antibody in THP-1 cells" FEBS Lett.397. 113-116 (1996)

[文献書誌] Shin-ichi Hoshino,et al.: "Mapping of the catalytic and epitopic sites of human CD38/NADase to a functional domain in the carboxy terminus" J.Immunol.158. 741-747 (1997)

[文献書誌] 堅田 利明,他: "最新内科学大系 第2巻科学としての内科学(井村裕夫編)" 中山書店, 372 (1997)

[文献書誌] 堅田 利明,他: "GTP結合蛋白質 (高井義美、堅田利明、成宮周 編)" 羊土社, 312 (1997)

1996 年度実績報告書

堅田利明東京大学, 薬学部, 教授 (10088859)

[文献書誌] 堅田利明,他: "最新内科学大系第2巻科学としての内科学(井村裕夫編)" 中山書店, 372 (1997)

[文献書誌] 堅田利明,他: "GTP結合蛋白質 (高井義美、堅田利明、成宮周編)" 羊土社, 312 (1997)