1997 年度実績報告書

遺伝子発現スイッチ機構を持つ遺伝子治療用ベクターの開発

研究課題

研究課題/領域番号	08557142
研究機関	東京大学
研究代表者	斎藤泉東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)
研究分担者	榊利之京都大学, 農学部, 助教授 (70293909)
キーワード	肝癌 / 遺伝子治療 / ベクター / アデノウイルス / AFPプロモーター
研究概要	播種性および転移性肝癌の特異的遺伝子治療をめざしたアデノウイルスベクターの開発を行った。まず部位特異的組換え醗酵Creを肝癌特異的に発現させる「制御ウイルス」を作製した。このウイルスは肝細胞特異的に働くα-フェトプロテイン(AFP)プロモーターの支配下に、核移行シグナルを付加したCre遺伝子を発現するアデノウイスルである。次にCre酵素により、強力なCAGプロモーターから目的遺伝子(今回はLacZ遺伝子)を発現する「発現標的ウイルス」を作製した。このウイルスは、CAGプロモーター下流のLacZ遺伝子との間にポリA付加シグナルを含むスタッファー配列を介在させてある。このスタッファー配列の両側にあるCre認識配列(lox配列)によりCre存在下ではスタッファーが除去され、CAGプロモーターからの強力な発現がオンになる。この二種類のウイルスを同時に肝癌由来HepG2細胞へ感染させると、AFPプロモーターから直接発現させた場合に比較して、約50倍の発現増強がみられた。この際非癌細胞株では発現がほとんどみられず、プロモーターの特異性は保たれていた。またヌードマウスにヒト由来肝癌細胞HuH7を接種し、播種性肝癌モデルを作製して二重感染法によりウイルスを経静脈的に播種すると、播種性肝癌細胞の10-15%に特異的なLacZ遺伝子の発現を認め、正常肝細胞では全く発現を認めなかった。アデノウイルスベクターをマウスに投与する時静脈注入法を用いると、その発現はほとんど肝細胞に特異的に起こることから、本法は全身的あるいは臓器全体への投与により、播種性および転移性肝癌の将来の遺伝子治療法となる可能性を持っていると考えられた。

研究成果
(5件)

すべてその他

すべて文献書誌 (5件)

[文献書誌] Kobayashi,M.et al.: "Expression a consitutively active phosphatidylinositol 3-kinase induces process formation in rat PC12 cells. Use of Cre/loxP recombination system." J.BIol.Chem.272. 16089-16092 (1997)
[文献書誌] Shibata,H.et al.: "Repid colorectal adenoma fromation initiated by conditional targeting of the Apc gene." Science. 278. 120-123 (1997)
[文献書誌] Arai,T.et al.: "A new system for stringent,high-titer VSV-G pseudotyped retrovirus bector induction by introduction of Cre recombinase into stable "pre-packaging" cell lines." J.Virol.72. 1115-1121 (1998)
[文献書誌] Sato,Y.et al.: "Enhanced and specific gene expression via tissue-specific production of Cre recombinase using adenovirus vector." Biochem.Bioph.Res.Co.(in press). (1998)
[文献書誌] Wakita,T.et al.: "Efficient conditional transgene expression in heparitis C virus cDNA transgenic mice mediated by the Cre/loxP system." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

1997 年度 実績報告書

遺伝子発現スイッチ機構を持つ遺伝子治療用ベクターの開発

研究代表者

斎藤 泉 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)

研究成果

[文献書誌] Kobayashi,M.et al.: "Expression a consitutively active phosphatidylinositol 3-kinase induces process formation in rat PC12 cells. Use of Cre/loxP recombination system." J.BIol.Chem.272. 16089-16092 (1997)

[文献書誌] Shibata,H.et al.: "Repid colorectal adenoma fromation initiated by conditional targeting of the Apc gene." Science. 278. 120-123 (1997)

[文献書誌] Arai,T.et al.: "A new system for stringent,high-titer VSV-G pseudotyped retrovirus bector induction by introduction of Cre recombinase into stable "pre-packaging" cell lines." J.Virol.72. 1115-1121 (1998)

[文献書誌] Sato,Y.et al.: "Enhanced and specific gene expression via tissue-specific production of Cre recombinase using adenovirus vector." Biochem.Bioph.Res.Co.(in press). (1998)

[文献書誌] Wakita,T.et al.: "Efficient conditional transgene expression in heparitis C virus cDNA transgenic mice mediated by the Cre/loxP system." J.Biol.Chem.(in press). (1998)

1997 年度実績報告書

斎藤泉東京大学, 医科学研究所, 助教授 (70158913)