| 研究課題/領域番号 |
08558101
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
岡野 光夫 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (00130237)
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| 研究分担者 |
坂井 秀昭 花王株式会社, 食品研究所, 主任研究員
菊池 明彦 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (40266820)
横山 昌幸 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (20220577)
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| キーワード | 細胞培養床 / 電子線重合 / ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド) / 親水性 / 疎水性 / 培養細胞単層シート / 肝実質細胞 / 細胞機能亢進 |
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| 研究概要 |
温度に応答して32℃を境により高温で水溶性から疎水性に変化するポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(PIPAAm)を固体表面に導入するとこの表面は低温で親水性、32℃より高温で疎水性になる。このような表面を用いて我々は昨年度酵素を用いずに温度変化のみで培養血管内皮細胞を培養単層シートとして回収するシステムを構築した。本研究ではこのPIPAAm修飾表面を用いて異なる培養細胞の単層培養細胞シートを剥離・回収する条件設定と回収した細胞機能を検討するとともに、異なる細胞培養シートを重ね合わせることでin vitroで組織用構造の構築を目指した。市販のポリスチレン培養床にIPAAmの存在下電子線を照射してPIPAAm修飾培養床を作製した。この表面上でラットの肝臓よりコラゲナーゼ灌流法によって採取した肝実質細胞を培養しコンフルエント(単層)になるまで増殖させた。細胞-細胞間の接着を維持したまま細胞を剥離すると凝集塊となる可能性があるため、支持体として底面にI型コラーゲンをコーティングしたセルカルチャーインサートを用いた。このインサートをコンフルエントに増殖した肝細胞の上に直接静置し、温度変化を利用して単層培養肝細胞シートをインサート底面に直接移行させた。PIPAAm培養床から細胞は完全に剥離し、細胞の高い生存率を維持したまま回収できた。電子顕微鏡による観察の結果、回収細胞は細胞-細胞間の密着結合を維持していることが確認できた。さらに、アルブミン産生、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ活性評価から回収細胞シートではその機能が亢進していることが示唆された。このように回収した肝細胞シートと血管内皮細胞シートとを重層化することで肝小様構造類似の組織が形成できることが明らかとなった。次年度はこのようなin vitroでの組織構築を利用したハイブリッド型人工臓器の構築を検討する。
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