| 研究課題/領域番号 |
08660349
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
前田 芳實 鹿児島大学, 農学部, 教授 (50041661)
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| 研究分担者 |
岡本 新 鹿児島大学, 農学部, 助教授 (70158814)
橋口 勉 鹿児島大学, 農学部, 教授 (80041614)
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| キーワード | 筋肉蛋白質 / ウズラ / カルパイン / カルパイン遺伝子 |
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| 研究概要 |
目的:カルパインはシステイン・プロテアーゼの一種であり、筋肉組織においては、筋繊維蛋白質の分解に重要な役割を演じていると考えられている。本研究では、ウズラのカルパイン遺伝子の発現制御について、遺伝子レベルからの解析を行うことを目的として、ウズラ・カルパイン遺伝子のクローニングを行い、その構造解析を試みた。
方法:無作為交配集団(RR)系統のウズラの浅胸筋からtotal RNAを抽出し、オリゴ(dT)セルロースカラムでpoly(A)^+RNAを精製した。poly(A)+RNAを鋳型とし、逆転転写酵素を用いて1st strand cDNAを合成し、これを鋳型にしてPCR法でDNAを増幅させた。プライマーはニワトリ・カルパインcDNAをもとにデザインされた。得られたPCR産物はlacz遺伝子を持つp123Tベクターにクローニングした。塩基配列はA.L.F.DNAシークエンサーで解析した。
結果:1)アガロースゲル電気泳動でcDNAの5'側より104bp、630bpのPCR産物が確認された。2)1041bp insertを含むプラスミドベクターは、EcoRVで3つの断片(297bp、303bp、441bp)に分けられた。3)5'側より1041番目までの塩基配列が決定された。ニワトリのカルパイン遺伝子と比較すると、39個(38コドン)の塩基置換が見られ、このうち33個(85%)はtransitionで、6個はtransversion(15%)であった。4)アミノ酸配列では6箇所で置換が見られ、ウズラとニワトリとの相同性は98.3%であり、ヒトとは74.1%であった。5)これらの領域はカルパインの4つのドメインのうち、ドメインIとドメインIIであった。
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