ヒト骨粗鬆症におけるエストロゲン局所産生の検討

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08670189
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 笹野 公伸 東北大学, 医学部, 助手 (50187142)
• 研究分担者: 高橋 和広 東北大学, 医学部, 助手 (80241628) ; 羽鳥 正仁 東北大学, 医学部・附属病院, 講師 (70208552)
• キーワード: 骨 / aromatase / estrogen / 17β-hydroxysteroid dehydrogenase / 免疫染色 / in situ hybridization / mRNA / RT-PCR

研究概要

我々はヒト骨組織における局所に於いてのestrogen産生を検討する目的で4%paraformaldehyde (pH 7.4)で2時間4°Cで固定後10%EDTAで72時間室温で脱灰したtibiaのparaffin包埋組織標本でandrogenをestroneに転換するaroamtase (arom),そのestroneをより生物学的活性の高いestrogenであるestradiolに転換するI型17β-hydroxysteroid dehydrogenase (17β-HSD type I)をStreptavidinbiotinを用いて免疫組織化学的に検出した。arom及17β-HSD共にresting osteoblasts及関節軟骨の中心部びあるchondrocytesで検出され、比較的豊富な細胞質を有するactive osteoblasts, CD68抗原を発現しているosteoclasts、osteocytes等では認められなかった。
又我々は3'biotinylated (Brigatti) tailingを施した27merのaromのoligonucleotidesを合成してMicroprobe法を用いて、alkaline phosphataseで発色させる事により上述の標本でaromのmRNA in situ hybridizationを施行することが出来た。aromのmRNA hybridization signalsも免疫染色で検討した蛋白発現同様にtibiaの骨膜周囲に存在しているresting osteoblasts及関節軟骨の中心部位のchondrocytesで認められることが示された。これらのaromのヒト骨組織における局在は未だ報告されてはいない。又食道癌による開胸手術で採取した肋骨、悪性骨腫瘍によるamputation手術から採取した健常な部位の大腿骨を含むヒト骨組織からも氷中でguanidine thiocyanateを加えてgrinderでhomogenizeすることによりtotal RNA fractionがdegradationをあまり伴わずに採取出来ることを示した。又比較的死後時間が短い剖検症例から採取した椎骨からもmRNAがとれる事が判明し、これらの手術及剖検で採取したヒト骨組織のarom mRNAの発現をRT-PCR法で現在半定量的に検討中である。

研究成果

• [文献書誌] H, Sasano et al: "Aromatase cytochrome P450 gene expression in endometrial carcinoma." British Journal of Cancer. 74. 1541-1544 (1996)
• [文献書誌] Hisayoshi Nakazumi, et al: "Estrogen Metabolism and Impaired Spermatogenesis in Germ Cell Tumors of the Testis." Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 81 (3). 1289-1295 (1996)
• [文献書誌] H, Sasano et al: "Aromatase and Steroid Receptors in Gynecomastia and Male Breast Carcinoma : An Immunohistochemical Study." Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 81 (8). 3063-3067 (1996)
• [文献書誌] H, Sasano et al: "Aromatase and 17β-Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1 in Human Breast Carcinoma." Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 81 (11). 4042-4046 (1996)
• [文献書誌] Keiko Kaga, et al: "Aromatase in Human Common Epithelial Ovarian Neoplasms." American Journal of Pathology. 149 (1). 45-51 (1996)
• [文献書誌] Noritaka Yabuki, et al: "Immunohistochemical Study of DNA Topoisomerase II in Human Gastric Disorders." American Journal of Pathology. 149(3). 997-1007 (1996)