好中球MPOフラグメントのリコンビナントパネルによるMPO自己抗体生産機序の解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08670265
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 国立予防衛生研究所
• 研究代表者: 鈴木 和男 国立予防衛生研究所, 生物活性物質部, 室長 (20192130)
• 研究分担者: 山越 智 国立予防衛生研究所, 生物活性物質部, 研究員 (00212283) ; 大川原 明子 国立予防衛生研究所, 生物活性物質部, 研究員 (30260277)
• キーワード: 自己免疫疾患 / ミエロパーオキシダーゼ / MPO / 好中球 / ANCA / 腎疾患 / 腎炎 / リウマチ

研究概要

正常時には血中に認められない好中球ライソゾーム酵素myeloperoxidase(MPO)に対する自己抗体MPO-ANCAが増加する疾患が注目されている。この自己免疫疾患の発生機序を解析する上で、自己抗体が認識するMPOのエピトープ部位の解析は重要である。これまでELISA法にて高抗体価を示したMPO-ANCA関連腎炎患者血清が、MPO H鎖(59kDa)の糖結合部位付近と反応することを明らかにした。そこで、これまで、リコンビナントMPO H鎖の各種ペプチド断片を作製してきた。本年度は、さらに、L鎖の各種ペプチド断片も作製した。この様な条件で確立した各種リコンビナントMPOペプチド断片遺伝子を組み込んだ大腸菌を大量に培養し、Ni-NTAアフィニテ-カラムを用いて精製した。得られたMPOペプチド断片を用いて、抗体との反応をwestern blot及びELISA法により解析に使用した。【方法】MPO cDNAを種々の断片領域に分け、His-タグ発現ベクターpQEに組み込み、大腸菌に導入した。各MPOペプチド断片の発現量が異なるため、2.5から60Lを培養し発現させた。その菌体をグアニジン塩酸にて変性後、Ni-NTAアフィニテ-カラムを用いて精製した。得られたそれぞれのペプチド断片は、患者血清を用いてwestern blotおよびELISA法によりMPO-ANCAの抗原認識部位を解析した。【結果・考察】ペプチド断片に対する患者血清の反応性を解析した結果、MPO-ANCA関連腎炎患者の血清は、N末端側のペプチド断片に反応した。今後、症例数を増やして病態とMPO-ANCA認識エピトープとの関連をさらに明かにする。

研究成果

• [文献書誌] Mohamed,A.et al.: "Production and characterrization of polyclonal anti-canine interleukin-8 antibodies." J.Vet.Med.Sci.58,219-224,1996. 58. 219-224 (1996)
• [文献書誌] Saeki,T.et al.: "Significance of myeloperoxidase in rapidly progressive glomerulonephritis." Am.J.Kidney Dis.26. 13-21 (1995)
• [文献書誌] Yamagoe,S.,et al.: "LECT2 : Purification of novel human neutrophil chemotactic protein." Immunol.Lett.52. 9-13 (1996)
• [文献書誌] Ishida-Okawara,A.,et al.: "Modulation of degranulation and superoxide generation" Biochim.Biophys.Acta. 1314. 239-246 (1996)
• [文献書誌] 鈴木和男: "アレルギーとサイトカイン:アレルギーとIL-8" 医療ジャーナル社, 13 (1996)
• [文献書誌] 山越智ら: "先端医療 炎症性サイトカインの情報伝達" 先端医療, 3 (1996)