| 研究概要 |
これまでに川崎病患児の歯面より分離、同定されたStreptococcus mitis(S.mitis),Nm-65株の培養上清中に血漿に浮遊したヒト血小板(platelet rich plasma,PRP)を凝集、活性化する因子(S.mitis-derived human platelet aggregation factor,Sm-hPAF)の存在することを明かにし、この因子の精製を行うと共に、その性状について報告して来た(FEMS Immunol.Med.Microbiol.,17,121,1997)。この研究の過程で、Sm-hPAFによって凝集するPRPと凝集しないPRPが存在することが明かにされた。本研究では、Sm-hPAFに応答しないPRPの反応機構を明かにすろことを目的とした。既にこれまでの研究において、Sm-hPAFに対し凝集しないPRPは血小板自体に異常があるのではなく、血漿中にこの凝集反応を阻害する因子が存在することを明かにした。そして、凝集反応を起こさなかったヒトの血漿をSephacryl S-200でゲル濾過し、阻害因子を含む粗分画を得る一方、この分画をマウスに免疫することにより、阻害因子の作用をblockするモノクロナール抗体(mAb)を作製し、更に粗分画とmAbとを用いたWestern blotから55kDaに相当する糖蛋白が阻害因子ではないかと想定された。平成9年度では、
1)mAbを用い、affinity columnにより阻害因子の精製を試みる一方で、肝細胞cell lineの培養上清中に阻害因子の存在することを見い出した。現在その濃縮液から阻害因子の精製を試みている。
2)半精製の阻害因子とmAb並びにポリクローナル抗体を用いて、ELISA法により阻害因子の定量化が可能となった。現在ヒト血漿中の同因子の定量化のための基礎実験が行われている。
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