遺伝性ムコ多糖代謝異常症の分子病態の解析-遺伝子治療の開発にむけて-

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08670869
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 岐阜大学
• 研究代表者: 祐川 和子 岐阜大学, 医学部, 助手 (60115409)
• 研究分担者: 福田 誠司 岐阜大学, 医学部, 助手 (30273147)
• キーワード: ムコ多糖症 / 遺伝子変異 / X染色体不活化 / 遺伝子クローニング

研究概要

研究目的
遺伝性ムコ多糖代謝異常症の早期診断、予後の予測、予防(出生前診断、保因者診断)および効率の良い治療法の開発を目的として本症の分子病態を解明する。
研究結果
1.病因病態解析
(1)酵素蛋白の機能発現について:MPSII型、IVA型の原因酵素であるIduronate-2-Sulfatase(IDS)およびGalNAc-6S Sulfatase(GALNS)の生合成、局在化、安定化および機能発現について明らかにするために、本年度はまずpET-32aベクターにそれぞれのcDNAを組み込み、大腸菌で融合蛋白質を大量発現させた。現在家兎に免疫し抗体を調製中である。来年度はこの抗体をプローブとしてwildとmutant酵素蛋白質を比較解析する。
(2)遺伝子変異の同定と遺伝的背景について:MPSII型IVA型例につきSSCPを主としたスクリーニング法で変異を検出し、これまでに確認した変異に加え、新たに各々10以上の変異を同定した。特にMPSIVA型は世界各国研究施設とのプロジェクト研究により欧米人、日本人の患者変異解析を行ない人種間の特異性を明らかにした。
(3)X染色体不活化の機構について:MPSII型(Hunter病)は男児に発症する。女児への浸透率は極めて低いがこれまでに2例の女児例を経験した。2例とも母親が保因者であり、父親由来の正常対立遺伝子が偏って不活化されていることを、mutationのmRNAレベルでの発現量とX染色体上に位置するandrrogen receptor遺伝子のメチル化の度合にて確認した。来年度はLyonizationに従わないこのような現象が何故起こるのかを明らかにしたい。
2.遺伝子治療の基礎的研究
(1)マウスcDNA、ゲノムDNAクローニング
MPSIVA型(GALNS)のcDNAクローニングに引き続きゲノムDNAをλFIX2 mouse MSV129ライブラリーを用いてクローニングし、プロモーター領域とexon 1〜7をカバーする複数のクローンを得た。今後さらに全長をカバーするようクローングし、モデルマウス作製に供したい。

研究成果

• [文献書誌] Seiji Fukuda: "Mucopolysaccharidosis IVA (Morquio A) : Three Novel Sinall Deletions in the N-Autylgalactosamie-6-Sulfate Sulfatase Gene" Hum,Mvt.8. 187-190 (1996)
• [文献書誌] Shunji Tomatsu: "Mucopolysaccharidosis IVA : Four New Eyonic Mutations in Patients with N-Acetylgalactosamine-6-Sulfate Sulfatase Deficiency" Am.J.Hum.Genet. 58. 950-962 (1996)
• [文献書誌] D.E.C.Cole: "Heteroallelic Missense Mutations of the Galactosamine-6-Sulfate Sulfatase (GALNS) Gene in a Mild Form of Morquio Disease (MPSIVA)" Am.J.Med.Genet.63. 558-565 (1996)
• [文献書誌] G.M.M.Rezvi: "Mucopolysaccharidosis IVA : a comparative study of polymorphic DNA haplotypes in the caucasian and Japanese populations" J.Inher.Metab.Dis. 19. 301-308 (1996)
• [文献書誌] A.Homma: "Multiple sulphatase deficiency and carotenaemia" J.Inher.Metab.Dis. 19. 88-89 (1996)
• [文献書誌] Kazuko Sukegawa: "Hunter Disease in a Girl Caused by R468Q Mutation in the Iduronate-2-Sulfatase Gene and Skewed lnactivation of the X Chromosome Carrying the Normal Allele" Hum.Mut.(in press). (1997)