|
新しいヒトPeptide 23/PAPファミリーペプチドのcDNAを単離するために、すでにわれわれがクローニングしたラットPeptide 23/PAP cDNAをプローブとして、ヒト膵ランゲルハンス氏島λgtll cDNAライブラリーをスクリーニングし、4個の陽性のクローンを得た。陽性のクローンを純化、増幅した後に、インサートを切り出し、pVZ-1プラスミドにサブクローニングした。サブクローニングしたプラスミドを増幅、精製し、制限酵素地図の作成、塩基配列の決定を行った。
制限酵素地図を作成した結果、4個のクローンは同一の塩基配列を含むと予想された。
4個のクローンのうち2個のクローンの全塩基配列を決定した。両クローンは5'末端および蛋白コード領域の1塩基を除き、同一の塩基配列を有していた。
これらのクローンによりコードされる蛋白は175個のアミノ酸からなると予測された。そのN末端側の26個のアミノ酸は疎水性で、シグナルペプチドと考えられた。成熟蛋白は149個のアミノ酸からなると考えられた。この蛋白はラットPeptide 23/PAPおよびヒトPAPとはそれぞれ66%、85%の相同性を示した。したがって、この蛋白は新しいヒトPeptide 23/PAPファミリーのペプチドであり、膵内分泌細胞で発現していると考えられた。
これらのクローンを用いて、マウスPeptide 23/PAPファミリーのcDNA、ゲノムDNAを単離する予定である。
|
