前白血病状態進展にかかわる転写因子異常の解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08671215
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 三谷 絹子 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50251244)
• 研究分担者: 黒川 峰夫 東京大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 小川 誠司 東京大学, 医学部・附属病院, 医員 ; 田中 智之 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (50227154) ; 宮川 清 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (40200133) ; 平井 久丸 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (90181130)
• キーワード: 骨髄異形成症候群 / t(11;19)(q.23;P13.1) / MLL / MEN / 転写因子 / 伸長因子

研究概要

進展期MDS症例に観察されるt(11;19)(q23;p13.1)の分子解析を行うことにより、新規融合遺伝子MLL/MENのクローニングを行った。MLLはAT hooksと2つのzinc finger domainsを有する転写因子であり、t(11;19)転座の結果、2つのzinc finger domainsを失っていた。一方、MENは849個のアミノ酸をコードする新規遺伝子であり、t(11;19)転座の結果、N末の45個のアミノ酸を失っていた。その後、MENはRNAポリメラーゼII伸長因子をコードしていることが報告された(Shilatifard,A.,et al.,Science271,1873-1876,1996)。私たちは、maltose-binding protein fusion及びGST fusionの形で大腸菌に発現させたMLL及びMEN蛋白質をウサギに免疫して、ポリクローナル抗体を得た。MLL/MEN、tMLL(患者白血病細胞で発現が期待される2つのzinc finger domains以下のシークエンスを失った短縮型のMLL)、MENのそれぞれのcDNAをCos7細胞に遺伝子導入し、この抗体を用いて蛋白質の発現を確認した。MLL/MEN、tMLL、MENはそれぞれ230kD,180kD,80kDの蛋白質として検出された。免疫組織染色の結果これらの蛋白質は主に核内に存在することが明らかになった。細胞を核分画と細胞質分画に分離して行ったウエスタン解析によっても、同様の結果が確認された。t(11;19)転座により形成されるMLL/MENは核内の転写制御の異常により前白血病を進展させるものと考えられた。

研究成果

• [文献書誌] Krokawa M: "Overexpression of the humman AML1b proto-oncoprotein leads to neoplastic transformation of NIH3T3 cells." Oncogene. 12. 883-892 (1996)
• [文献書誌] Sasaki K: "TPO/c-MPL ligand induces tyrosine phosphorylation multiple cellular proteins including proto-oncogene produckts,VAV and c-CBL,and RAS signaling molecules." Biochem.Biophys.Res.Commun.216. 338-347 (1996)
• [文献書誌] Yamagata T: "A novel interferon regulatory family transcription factor,ICSAT/Pip/LSIRF,that negatively regulates the activity if interferon-regulated genes." Mol.Cell.Biol.16. 1283-1294 (1996)
• [文献書誌] Tanaka T: "The extracellular signal-regulated kinase pathway phoshorylates AML1,an acute myeloid leukemia gene product,and potentially regulates its transactivation ability." Mol.Cell.Biol.16. 3967-3979 (1996)
• [文献書誌] Ogwa S: "Structurally altered Evi-1 prorein generated in the 3q26q21 syndrome.21GC05:Oncogene" 13. 183-191 (1996)
• [文献書誌] Kurokawa M: "A conserved cystein residue in the runt homology domiain of AML1 is required for the DNA binding ability and the transforming activity on fibroblasts." J.Biol.Chem.271. 16870-16876 (1996)
• [文献書誌] Yamagata T: "Eleveted plated count features the variant type of BCR/ABL junction in chronic myelogenous leukaemia." Br.J.Haematol.94. 370-372 (1996)
• [文献書誌] MITANI K: "Chromosomal abnormalities and oncogenes." Int.J.Hematol.63. 81-93 (1996)
• [文献書誌] Ogawa S: "Increased Evi-1 expression is frequently observed in blastic crisis of chronic myelocytic leukemia." Leukemia. 10. 788-794 (1996)
• [文献書誌] Hirai H: "cell cycle regulator genes in human leukemias." Proceedings of The First Fukuoka International Symposium on Medical Science;An approach to disease.131-141 (1996)
• [文献書誌] Hirai H: "Recent progress in molecular mechanisms of leukemogenesis:The cyclin-dependent kinase 4-inhibitor gene in human leukemias." Proceedings of The XVIII Symposium of the International Association for Comparative Research on Leukemia and Related Disease. (in press). (1996)
• [文献書誌] Ueno H: "Growth and survival signals transmitted via distinct NPXY motifs within leukocyte.tyrosine kinase,an insulin receptor-related tyrosine kinase." J.Biol.Chem.271. 27707-27714 (1996)