可溶性G-CSFレセプターの解明

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08671239
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 岡村 精一 九州大学, 医学部, 講師 (20136435)
• 研究分担者: 浅野 嘉延 九州大学, 医学部, 助手 (60271110) ; 中島 衡 九州大学, 医学部, 助手 (70188960)
• キーワード: 可溶性G-CSFレセプター / G-CSF / cDNA / 先天性好中球減少症 / 急性骨髄性白血病 / 遺伝子発現 / スプライシング / セルソーター

研究概要

ヒト血清をビオチン標識したG-CSFと孵置した後にnative PAGEで泳動し,ニトロセルロース膜に移したものとperoxidase(PO)標識streptavidinと反応させPOを発色させた.すると,95kDと105kDにバンドが検出された.G-CSFの分子量は約20kDを減じると,75kDと85kDのG-CSFと結合する血清蛋白の存在が考えられた.さらに,抗G-CSFレセプター抗体を用いた実験でもほぼ同じ大きさに2つのバンドを認めた.
ヒト好中球系細胞の成熟段階における,可溶性G-CSFレセプターの発現状況をRT-PCR法で検索した.報告されたG-CSFレセプターcDNAはalternative splicingにより7種類有るが,可溶性G-CSFレセプターは膜貫通部を欠いたII型のcDNAがコードしていると考えられる.膜貫通部を挟むプライマーを用いてRT-PCRを行うと,これは野性型(I型)に比べて,短いバンドとして検出される.ヒト骨髄細胞をセルソーターで成熟段階にしたがい,分離してG-CSFレセプターの膜貫通部を挟むプライマーを用いてRT-PCRを行うと,2つのバンドが検出され,可溶性G-CSFレセプター由来の短いバンドは成熟段階が進行するに従いその割合が増加していた.
G-CSFレセプターの体細胞遺伝子は17のエクソンからなり,全体ではないが第15エクソンの大部分が膜貫通部をコードしている.先天性好中球減少疾患者より第15エクソン全体が欠失しているクローンを得た,これらはヒト骨髄性白血病細胞株の多くでも検出出来た.このcDNAを発現ベクターに入れCHO-K1細胞に遺伝子導入し得た.
マウス可溶性G-CSFレセプターを試験管内で作用させ,正常G-CSF作用を抑制すること,及びヒト骨髄性白血病細胞の増殖を抑制することを見いだした。

研究成果

• [文献書誌] Takenaka K.: "Generation of human natural killer cells from peripheral blood CD34+cells mobilized by granulocyte colony-stimulating factor." British Journal of Haematology. 94(4). 788-794 (1996)
• [文献書誌] Kuroiwa M.: "Effects of granulocyte colony-stimulating factor on the hemostatic system in healthy volunteers." International Journal of Hematology. 63(4). 311-316 (1996)
• [文献書誌] Asano Y.: "Effect of (-)-epigallocatechin gallate on leukemic blast cells from patients with acute myeloblastic leukemia." Life Sciences. 60(2). 135-142 (1997)
• [文献書誌] Tsutsui.S.: "Prognostic significance of immunological parameters in gatients with esophageal cancer. In vitro study of deoxyspergualin on function of lymphocytes and bone marrow cells from healthy volunteers." Hepato-Gastroenteology. 43. 501-509 (1996)
• [文献書誌] Matsunaga.T.: "Rotenone,a mitochondrial NADH dehydrogenase inhibitor,induces cell surface expression of CD 13 and CD38 and apoptosis in HL-60 cells." Leukemia Lymphoma. 20. 487-494 (1996)
• [文献書誌] Chen,F.: "Reversible primary hypothyroidism with blocking or stimulating type TSH binding inhibitor immunoglobulin following recombinant interferon-a therapy in patients with pre-existing thyroid disordes." Clinical Endocrinology. 45. 207-214 (1996)
• [文献書誌] Tanaka,Y.: "Effect of IL-10 on collagen-induced arthritis in mice." Inflammation Research. 45. 283-288 (1996)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプターを介する増殖・分化のシグナル伝達" 医学のあゆみ. (印刷中).
• [文献書誌] 岡村精一: "造血幹細胞からの顆粒球系細胞の分化" Mebio. (印刷中).
• [文献書誌] Asono Y.: "Analysis of G-CSF receptor in various hematological disorders. Approaches to Diseases (Niho Y.ed)" Kyushu University Press,Fukuka, 12 (1996)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSFレセプターのシグナル伝達機構とその異常.Annal Rwview 血液97" 中外医学社,東京, 16 (1997)
• [文献書誌] 岡村精一: "G-CSF受容体異常.キーワード1997-'98血液" 先端医学社(印刷中),