1997 年度実績報告書

血小板放出反応におけるADPリボシル化因子(ARF)の役割

研究課題

研究課題/領域番号	08671246
研究機関	札幌医科大学
研究代表者	照井健札幌医科大学, 医学部, 助手 (50281233)
研究分担者	坂牧純夫札幌医科大学, 医学部, 講師 (00196081)
キーワード	ADPリボシル化因子 / ホスホリパーゼD / 血小板凝集 / コラーゲン / β-thrombogloburin / 放出反応 / Breferdin A
研究概要	血小板の活性化に伴う凝集放出反応については、様々な機構が想定されてきたが、なお不明な点が多く残されている。本研究では細胞内の小胞輸送、エクソサイトーシス等に重要な役割を担っているADPリボシル化因子(ARF)、フォスフォリパーゼD(PLD)の血小板凝集放出反応における役割を明らかにするとことを目的とする。我々はこれまで血小板におけるARFの発現、ARF依存性PLD活性を確認した。本年はARF、PLDの阻害剤であるBreferdin A(BFA)を用いて血小板凝集、放出反応におけるこれらの因子の役割を検討した。 1.BFAによる血小板凝集への影響:ADPによる血小板凝集に対するBFAの抑制効果は、最大凝集を80%から60%の抑制(抑制率25%)にとどまった。しかしBFA処理により凝集の解離現象が見られ、二次凝集が抑制されるている可能性が考えられた。そこで血小板凝集において一次凝集を示さず、二次凝集、すなわち血小板自体からの放出分泌反応を介して凝集を惹起するコラーゲンによる血小板凝集へのBFAの影響を検討した。BFAは濃度依存性にコラーゲンによる血小板凝集を抑制し25μM以上の濃度で抑制率約50%を示した。 2.BFAによるARF-PLDシグナルへの影響:コラーゲン刺激によるARFの活性化を[^<35>S]-GTPγS結合促進活性により検討したところ、BFAは濃度依存性にARFの活性化を阻害し、25μM以上の濃度で約40%に抑制した。またARF依存性PLDもBFAにより濃度依存性に阻害し、25μM以上の濃度でPLD活性は約50%に低下した。 3.血小板分泌放出反応に対するBFAの抑制効果:コラーゲン刺激による血小板放出反応をα顆粒に存在するβトロンボグロブリン(βTG)の放出により検討したところ、25μMのBFAはβTGの放出を約40%抑制した。以上よりARF-PLDシグナルは血小板機能の活性化、分泌、放出反応に関わっていることが示唆された。

研究成果
(6件)

すべてその他

すべて文献書誌 (6件)

[文献書誌] Randazzo P.A.et al: "The myristoylaed amino terminus of ADP-ribosylation factor 1 is a phospholipid and GTP-senstive switch." J.Biol.Chem.270. 14809-14815 (1995)
[文献書誌] Terui T.et al: "Effect of Acid phospholipids on nucleotide exchange properties of ADP-ribosylation factor 1" J.Biol.Chem.269. 28130-28135 (1994)
[文献書誌] Kahn R.A.et al: "Mutationl analysis of Saccharomyces cerevisiae ARF1." J.Biol.Chem.270. 143-150 (1995)
[文献書誌] Cavenagh M.M.et al: "ADP-ribosylation factor(ARF)-like 3,a new member of the ARF family of GTP-binding proteins cloned from human and rat tissues." J.Biol.Chem.269. 18937-18942 (1995)
[文献書誌] Sakamaki S.et al: "Long term survaival and differentiation of human poripheral blood CD34_+ cells in SCID mice." Int J Hematol.69. 375-384 (1997)
[文献書誌] Randazzo R.A.et al: "The amino terminus of ADP-ribosylation factor(ARF)1 is essential for interaction with Gs and ARF GTPase-activating protein." J.Biol.Chem.269. 29490-29494 (1994)

1997 年度 実績報告書

血小板放出反応におけるADPリボシル化因子(ARF)の役割

研究代表者

照井 健 札幌医科大学, 医学部, 助手 (50281233)

研究成果

[文献書誌] Randazzo P.A.et al: "The myristoylaed amino terminus of ADP-ribosylation factor 1 is a phospholipid and GTP-senstive switch." J.Biol.Chem.270. 14809-14815 (1995)

[文献書誌] Terui T.et al: "Effect of Acid phospholipids on nucleotide exchange properties of ADP-ribosylation factor 1" J.Biol.Chem.269. 28130-28135 (1994)

[文献書誌] Kahn R.A.et al: "Mutationl analysis of Saccharomyces cerevisiae ARF1." J.Biol.Chem.270. 143-150 (1995)

[文献書誌] Cavenagh M.M.et al: "ADP-ribosylation factor(ARF)-like 3,a new member of the ARF family of GTP-binding proteins cloned from human and rat tissues." J.Biol.Chem.269. 18937-18942 (1995)

[文献書誌] Sakamaki S.et al: "Long term survaival and differentiation of human poripheral blood CD34_+ cells in SCID mice." Int J Hematol.69. 375-384 (1997)

[文献書誌] Randazzo R.A.et al: "The amino terminus of ADP-ribosylation factor(ARF)1 is essential for interaction with Gs and ARF GTPase-activating protein." J.Biol.Chem.269. 29490-29494 (1994)

1997 年度実績報告書

照井健札幌医科大学, 医学部, 助手 (50281233)