血管新生抑制物質-アンギオスタンチンの機能部位の分子生物学的解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08671249
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 坂田 洋一 自治医科大学, 医学部, 助教授 (40129028)
• 研究分担者: 三室 淳 自治医科大学, 医学部, 講師 (10221607)
• キーワード: 血管新生 / アンギオスタチン / プラスミノゲン / 癌転移

研究概要

研究は、癌の転移巣からの浸潤転移を抑制しているアンギオスタチンが、プラスミノゲンの構造の一部であるクリングル領域1+2+3(K1+2+3)とほぼ同じ構造をした物質であったという報告から出発している。さらに、プラスミノゲンのノックアウトマウスでは、平滑筋細胞やケラチノサイトの移動が見られないために、創傷治癒が見られなくなることが明らかにされ、プラスミノゲンの細胞移動に果たす役割の重要性が確認された。我々は、まず、このK1+2+3を認識するモノクロナル抗体を30種類近く作製した。そして、これらの抗体のcharacterizationを進めるとともに、これを細胞移動や、動物を用いた転移実験に用いてK1+2+3のどの部位が転移抑制に重要かを明らかにし、癌の転移を抑制する手段を模索する計画を立てた。まず、抗体の解析を施行した。プラスミノゲンはK1+2+3の部位にいわゆるリジン結合部位と呼ばれる構造を持ち、この部位にリジンが結合すると大きく構造が変化する。我々の抗体の一部(7種類)は、リジン結合部位以外のところに結合するがそれでも結合によりプラスミノゲンの構造変化を惹起したため(世界初)、細胞を用いた実験に利用することも視野に入れ、更にその解析を進め、報告した(J.Biochem.121:278-287,1997)。現在、characterizationを終了した抗体や、K1+2+3ペプチド、α2-プラスミンインヒビタ、フィブリノゲン、プラスミノゲンアクチベータインヒビタやウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベータの受容体を用いて、細胞の進展移動に及ぼすこれらの因子の影響などを解析中である。しかし、これまで報告されている手技が極めてアーチファクトの入りやすい系であることもあり、結果にばらつきがみられている。いかようにも解釈できるために、試行錯誤しながら更に再現性の良い実験モデルを模索中である。

研究成果

• [文献書誌] 森弘司: "高Plasminogen activator inhibitor-1血症を特徴とするDICにより急性腎不全をきたした1例" 透析会誌. 29. 1305-1311 (1996)
• [文献書誌] 高橋宏美: "再生不良性貧血・発作性夜間血色素尿症症候群の経過中、他臓器血栓症を契機に診断されたプラスミノゲン栃木型異常症" 臨床血液. 36. 249-254 (1996)
• [文献書誌] Kazuki Niwa: "A γ Gly-268 to Glu substitution is responsible for impaired fibrin assembly in a homozygous dysfibrinogen Kurashiki 1" Blood. 87. 4686-4694 (1996)
• [文献書誌] Yoichi Kawata: "Expression of plasminogen activator inhibitor-2 in the adult and embryonic mouse tissue." Thromb.Haemost.76. 569-576 (1996)
• [文献書誌] Seiji Madoiwa: "A battery of monoclonal antibodies that induce unique conformations to evolve cryptic but constitutive functions of plasminogen." J.Biochem.121. 278-287 (1997)
• [文献書誌] Takashi Watanabe: "Successful management of pregnancy in patient with von Willebrand disease Normandy." Obstet Gynecol. (in press).
• [文献書誌] Shinji Asakura: "Fibroblasts spread on immobilized fibrin monomer by mobilizing a β 1-class integrin, together with a vitronectin receptor α v β 3 on their surface." J.Biol.Chem.(in press).
• [文献書誌] Toyotoshi Yasuda: "Localization of plasminogen activators and their inhibitors in squamous cell carcinoma of the head and neck." Head and Neck.(in press).
• [文献書誌] Yoshihiko Sugawara: "Adenovirus-mediated transfer of tissue-type plasminogen activator gene to human endothelial cells." Circulation Res.(in press).
• [文献書誌] Hiroshi Funayama: "Monocytes modulate the fibrinolytic balance of endothelial cells." Thrmob.Res.(in press).
• [文献書誌] 静間奈美: "梗塞栓症にて発症した先天性プロテインC欠乏症の若年成人の1例" 日本神経治療学. (in press).
• [文献書誌] 坂田洋一: "中外医学社、東京" チャートによる内科診断学, 357 (1996)
• [文献書誌] 坂田洋一: "中外医学社、東京" チャートで学ぶ病態生理学, 413 (1996)