本研究ではまず造血幹細胞、特にCD34陽性細胞のhomotypic aggregationに関与する細胞表面分子群を発現クローニング法を用いて検索し、その中から増殖に関与する分子を同定し、さらその分子の機能を増殖、分化、またシグナル伝達等の観点から解析を行うことを目的とする。新規の細胞表面分子の検索は、造血幹細胞の増殖、分化機構の解明に役立ち、さらに造血器腫瘍、ことに白血病細胞起源の詳細な診断、遺伝子治療などの治療への応用につながると考える。 まずCD34陽性の白血病細胞株(KG-1など)や造血器腫瘍患者骨髄血のCD34陽性細胞よりmRNAを抽出し、オリゴdT及びランダムプライマーを用いてcDNAに逆転写した。これらを有核細胞発現プラスミドに組み込み、発現ライブラリーを作成した。これら発現ライブラリーを電気穿孔法を用いてCOS-7細胞に遺伝子導入を行い、CD34陽性細胞と反応する細胞群をパニング法の変法により濃縮した。この系を用いてKG-1の発現ライブラリーからCD34陽性細胞に結合する分子をコードするcDNAを2個単離した。このcDNAの塩基配列を決定し、既知の遺伝子と比較検討した。その結果このcDNAはCD54(ICAM-1:intercellular adhesion molecule 1)遺伝子の一部と同一で、新規の遺伝子ではなかった。 今後も引き続き残りのcDNAの解析を行なう予定である。また他の細胞の発現ライブラリーから、この系を用いてCD34陽性細胞に結合する分子をコードするcDNAを単離することも計画している。
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