外来遺伝子導入グリオーマ細胞を用いた悪性グリオーマのワクチン療法

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08671597
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 琉球大学
• 研究代表者: 宮城 航一 琉球大学, 医学部, 助教授 (60102274)
• 研究分担者: 銘苅 晋 琉球大学, 医学部・附属病院, 助手 (50200316) ; 田邊 将夫 琉球大学, 医学部, 助教授 (30049077) ; 牧野 芳大 琉球大学, 医学部, 助教授 (60039930)
• キーワード: Glioblastoma / Gene therapy / B7 / Tumor vaccine

研究概要

1)mouse B7-1,B7-2 geneのcDNAの作成
Balb/c mouse 15頭のspleen cellをLPS25μg/mlを含む培養液で刺激し、mRNAを回収した.回収したmRNAをテムプレートにしてRT-PCR法にてmouse B7-1,B7-2geneのcDNAを作成した.
2)レトロウイルスプラスミドベクターpLXENへmouse B7-1,B7-2geneのcDNAの組み換え.
mouse B7-1,B7-2geneのcDNAをプラスミドpCRIIに組み換えし、これを大腸菌にtransformしてpCRII-B7-1,B7-2を得た.大量培養して得たpCRII-B7-1,B7-2をEcoRIで処理し、pLXENに組み換えしてpLXEN/B7-1とpLXEN/B7-2を得た.
3)組み換えウイルス産生細胞の作成
pLXEN/B7-1とpLXEN/B7-2をパッケージング細胞PA317、GP-E86にリン酸カルシウム法にて遺伝子導入、細胞選択をG418にて行い組み換えウイルス産生細胞を作成した.