| 研究課題/領域番号 |
08672095
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
形態系基礎歯科学
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| 研究機関 | 東京歯科大学 |
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研究代表者 |
加藤 哲男 東京歯科大学, 歯学部, 助教授 (00159253)
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| 研究分担者 |
山中 あゆみ 東京歯科大学, 歯学部, 助手 (40231667)
三浦 直 東京歯科大学, 歯学部, 助手 (10266570)
石原 和幸 東京歯科大学, 歯学部, 講師 (00212910)
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| 研究期間 (年度) |
1996 – 1998
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| キーワード | 歯周病 / サイトカイン / Porphyromonas gingivalis / Actinobacillus actinomycetemcomitans / 溶血活性 / 菌体表層抗原 / 内毒素 / モノクローナル抗体 |
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| 研究概要 |
Actinobacillus actinomycetemcomitansは、デンタルプラーク中に棲息する通性嫌気性のグラム陰性桿菌であり、若年性歯周炎および成人性歯周炎に深く関与している。溶血素に注目して、A.actinomycetemcomitansから溶血活性を担う遺伝子のクローニングを行った。その結果、2つのクローン、TZAa1とTZAa2、が得られた。DNA塩基配列、SDS-PAGE解析およびWestern blot解析から、TZAa1の示す溶血活性は分子量約1万のタンパクが担っていることが示唆され、アミノ酸配列の相同性検索の結果わずかではあるが大腸菌由来のphospholipase Lと類似していることがわかった。
A.actinomycetemcomitans 内毒素を含む菌体表層抗原に対するモノクローナル抗体を作成した。特に強く反応したモノクローナル抗体は、LPSのコア多糖領域を認識していると推測した。このモノクローナル抗体を用いて、臨床分離株を含む数種類の菌株からのLPSとの交差反応性を調べた。その結果、同じ血清型bからのLPSの中にも反応性を示さないものがあることがわかった。さらに、菌体表層多糖抗原を分離・精製し、それらの標品の抗原性をモノクローナル抗体を用いて検討した。得られた2種の表層多糖成分は、LPSに対するモノクローナル抗体の反応性およびウサギ免疫血清の反応性から、異なる抗原性状を有していることがわかった。一方は、モノクローナル抗体と反応性のあるLPSあるいはLPSの一部を有する画分であり、他方は血清型b特異抗原を含む画分であることがわかった。
Porphyromonas gingivalisは、歯周病局所から高頻度に分離されるグラム陰性偏性嫌気性菌である。本菌から57kDaの外膜タンパク(outer-membrane protein;OMP)、菌体表層多糖(polysaccharide;PS)および内毒素(lipopolysaccharide;LPS)を分離精製し、これらの標品がヒト歯肉線維芽細胞(HGF)から炎症性サイトカインであるIL-6およびIL-8の産生を誘導するか否かを検討した。その結果、P.gingivalis LPSだけではなく、OMPおよびPSも有意にHGFから炎症性サイトカインを誘導することがわかった。
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