組織カリクレインファミリーの新しい生理機能と成長因子前駆体のプロセッシング

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08672129
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 細井 和雄 徳島大学, 歯学部, 教授 (10049413)
• 研究分担者: 松本 拓哉 徳島大学, 歯学部, 助手 (90284299) ; 赤松 徹也 徳島大学, 歯学部, 助手 (80294700) ; 吉川 大和 徳島大学, 歯学部, 助手 (20274227) ; 金森 憲雄 徳島大学, 歯学部, 助教授 (90064865)
• キーワード: 組織カリクレインファミリー / プロレニン変換酵素 / 真性組織カリクレイン / 唾液腺 / マウス / プロセシング酵素

研究概要

1.ICRマウスの唾液腺よりアミノ酸配列において互いにきわめてホモロジーの高い組織カリクレイン,mK1,mK9,mK13,およびmK22を得,組織カリクレインmK13はプロレニン変換酵素であることを確認した.今回EGF結合蛋白質mK9がRen-2プロレニンを特異的に切断し,mK13の1/10の活性で成熟レニンを与えることを見いだした.同基質蛋白に対してmK22(β-endopetidase)は2種の産物,レニンおよびアルギニルレニンを与えた.その活性はmK9によるプロレニン変換活性とほぼ同程度であった.しかしmK1(真性組織カリクテイン)はプロレニンを全く限定水解しなかった.
2.DBA/2Nマウス顎下腺より組織カリクレインファミリーに属する酵素を純化した.アミノ酸配列ならびにRT-PCRクロニングにより得たcDNAのシーケンスからこの酵素はプロレニン変換酵素mK13/mK26(PRECE,およびPRECE-2)と極めてホモロジーが高く(アミノ酸配列でPRECEおよびPRECE-2と99.2%,および96.2%),実際にプロレニン変換活性およびキニン遊離活性を有することが明らかになった.上記2系統のマウスでの2種の酵素の発現状態から今回クローニングした組織カリクレインはPRECEのアロザイム(PRECE^b)であると考えられた.
3.マウスの真性組織カリクレインmK1を用いて作製した抗体からmK1特異的な抗体プローブを作製した.本抗体を用いて顎下腺におけるmK1の局在を酵素免疫法(光学顕微鏡)およびイムノゴールド法による免疫電顕によって調べた.mK1は一部の顆粒性導管(GCT)細胞の分泌顆粒に局在した.雌雄とも陽性分泌顆粒を含む細胞と陽性分泌顆粒を含む細胞がモザイク状に混在した。

研究成果

• [文献書誌] Hosoi,K.et al.: "ATP-and EGF-stimulated phosphatidylinositol synthesis by two different pathways,phopsholipase D and diacylglycerol kinase,in A-431 epidermoid carcinoma cells" Biochemistry and Cell Biology. 74(2). 197-209 (1996)
• [文献書誌] Kurihara,K. et al.: "Regulation of Na^+,K^+-ATPase in submandibular glands of hypophysectomized male mice by steroid and thyroid hormones." Jounal of Histochemistry and Cytochemistry. 44(7). 703-711 (1996)
• [文献書誌] Tajima,Y, et al.: "In vivo modulation of proliferating cell nuclear antigen in growth plate chondrocytes from normal,hypophysectomized,and growth hormone-treated hypophysectomized rats -A comparative immunohistochemical study with image analysis-" Jounal of Histochemistry and Cytochemistry. 44(7). 713-720 (1996)
• [文献書誌] Gresik,E.W.et al.: "The redent granular convoluted tubular cell-An update" European Journal of Morphology. 34(3). 221-224 (1996)
• [文献書誌] Kikkawa,Y.et al.: "Prorenin processing and restricted endoproteolysis by mouse tissue kallikrein family enzymes(mK1,mK9,mK13,and mK22)." Biochimica et Biophysica Acta. (in press). (1997)
• [文献書誌] Hosoi,K.et al.: "Salivary gland tissue kallikrein family and processing of growth factor precursors and proenzymes" European Journal of Morphology(Stenone II supplement). (in press). (1998)