| 研究課題/領域番号 |
08672636
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 研究機関 | 山梨医科大学 |
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研究代表者 |
久米 章司 山梨医科大学, 医学部, 教授 (50010492)
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| 研究分担者 |
佐藤 金夫 山梨医科大学, 医学部, 教務職員 (20242662)
矢冨 裕 山梨医科大学, 医学部, 助手 (60200523)
尾崎 由基男 山梨医科大学, 医学部, 助教授 (30134539)
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| キーワード | 燐酸化ミオシン / 血小板凝集 / 散乱光 / 糖尿病 |
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| 研究概要 |
我々は最近開発した散乱光を用いた血小板凝集計を用いて、血管病変を伴う糖尿病症例より採取した血小板では、刺激剤なしで凝集が起きるいわゆる自然凝集が高率に起きることを認めた。また、脳血管障害の患者においても同様に自然凝集が有意に増加していることを確認できた。自然凝集が発生することは、生体内ですでに血小板が活性化されていることを示唆する。血小板凝集にはその骨格蛋白が深く関係しているため、次に骨格蛋白の一つであるミオシンの活性化状態を評価することにした。ミオシン活性化状態では、ミオシン軽鎖キナーゼにより燐酸化される。種々の刺激による血小板ミオシンの燐酸化反応は^<32>Pリン酸を含むATPをもちいて判定可能である。一方、無刺激状態の血小板のミオシン燐酸化状態を従来のような放射性リンを用いた方法で評価することは困難であった。そこで我々は燐酸化ミオシンのみを認識する単クローン抗体を作成し、ミオシン全体の量との比によりミオシン燐酸化を定量的に測定する方法を開発した。この抗体とミオシン全体を認識する抗体を用い、ミオシンの何パーセントが燐酸化されているかが評価できる。これまでに血管病変を有する種々の症患において血小板のミオシン燐酸化が有意に増加していることを認めている。また、まだ予備的な結果であるが自然凝集とミオシン燐酸化との相関があることが示唆されている。
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