細胞増殖因子による放射線誘導アポトーシス抑制機構に関する研究

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08680576
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 加藤 修 広島大学, 原爆放射能医学研究所, 助教授 (90214361)
• キーワード: VEGF / アポトーシス / bclファミリー / 転写因子 / zinc-finger

研究概要

ヒト白血病細胞株CMK86における血管内皮細胞(VEGF)の放射線誘導アポトーシス抑制効果の分子機序を明らかにすることを目的として実験を行い、以下の結果を得た。
1.VEGF刺激によるMCL1発現量の増加
アポトーシス抑制に働くことが知られているbclファミリー(BCL-2,BCL-XL,MCL-1)のmRNA発現量、蛋白発現量を、VEGF(50ng/ml)添加のメディウムで4時間刺激したCMK86細胞においてノーザンブロット、ウエスタンブロットハイブリダイゼーション法により検討した。VEGF刺激によりCMK86細胞においてBCL2、BCL-XLのmRNA、蛋白発現量に変化は認められなかったが、MCL-1のmRNA、蛋白発現量の増加が認められた。MCL1がVEGFによるアポトーシス抑制作用に関与していることが明らかとなった。
2.VEGF刺激により発現増加が認められた新規転写因子遺伝子ZK-7の同定
CMK86細胞においてVEGFにおいて発現誘導される転写因子遺伝子を同定するためにarbitrary PCRを行った。zinc-finger motifに相当するdegenerate primerを用いた結果、新規転写因子遺伝子ZK-7をクローニングした。
ZK-7蛋白は全長298アミノ酸でN-末端にKruppel-associated box(KRAB)-A boxを有し、続いて7個のC_2H_2タイプのzinc-finger motifを持っている。今後は、ZK-7蛋白が結合するDNA配列、およびZK-7蛋白が発現調整する標的遺伝子の同定を通じて、アポトーシスにおけるZK-7蛋白の役割を解明する予定である。

研究成果

• [文献書誌] NAKAGAWA,Y.: "Colon tissue implanted into the glandular stomach in rats lack susceptibility to N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) carcinogenesis" Oncology Reports. 4. 517-519 (1997)
• [文献書誌] WATANABE,H.: "Induction of insulinomas and kidney tumors in SD male rats by x-irradiation of gastric region" J Toxicol Pathol. 10. 77-81 (1997)
• [文献書誌] KIMURA,A.: "c-kit point mutation in patients with myeloproliferative disorders" Leukemia and Lymphoma. 25. 281-287 (1997)
• [文献書誌] MORITA,E.: "A novel point mutation in the steroid sulfatase gene in x-linked ichthyosis" J Invest Dermatol. 109. 244-245 (1997)
• [文献書誌] TAKAHASHI,T.: "The role of glucuronidation in 7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin resistence in vitro" Jpn J Cancer Res. 88. 1211-1217 (1997)
• [文献書誌] WATAMABE,H.: "Strain differences in induction and modification of stomach tumor development in mice treated with X-irradiation" J Toxicol Pathol. 10. 211-215 (1997)
• [文献書誌] OGURI,Y.: "Expression of γ-glutamylcysteine synthetase (γ-GCS) and multidrug resistance-associated protein (MRP). but not human canalicular multispecific organic anion transporter (cMOAT), genes correlates with exposure of human lung cancers to platinum drugs." Br J Cancer. (in press).
• [文献書誌] SHOJI,S.: "Correlation of developmental malformations and intrauterine deaths in γ-ray-irradiated scid mice embryos" Int J Rad Biol. (in press).