免疫応答機構解析のための新規なCaged 化合物の開発とその応用

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08680639
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 東邦大学
• 研究代表者: 岩村 道子 東邦大学, 理学部, 教授 (90057597)
• 研究分担者: 小林 芳郎 東邦大学, 理学部, 教授 (10134610)
• キーワード: ロイシルロイシンメチルエステル / アポトーシス / ケージド化合物 / 細胞障害性 / マクロファージ系細胞株 / 5-O-(β-Glucopyranosyl)-2-Nitrobenzyl

研究概要

ロイシルロイシンメチルエステル(Leu-Leu-OMe)はマクロファージやNK細胞にアポトーシスという形で細胞障害を起こすことが知られている。これまでに報告した2-nitrobenzyl caged Leu-Leu-OMe1は、効率よく基質を放出するものの水溶性が低いことが問題であった。この2-ニトロベンジルの5位にグルコースを導入した5-O-(β-glucopyranosyl)-2-nitrobenzyl caged Leu-Leu-OMe2を合成したところ、PBS(リン酸緩衝食塩水)-1%DMSOへの溶解度、細胞障害のいずれにおいても、これまでのものよりも格段にすぐれた結果が得られた。
2の合成にはグルコースのトリクロロアセトイミデ-トと5-ヒドロキシ-2-ニトロベンズアルデヒドによりo-グリコシル化をおこない、還元後p-ニトロフェニル炭酸エステルとしLeu-Leu-OMeと反応させた。培養細胞HL60(マクロファージ系細胞株)に対する2の細胞障害性はFACScanフローサイトメーターを用いてアポトーシスに伴う形態変化として定量した。
2のPBS-1%DMSOへの溶解度は1よりもおよそ30培増加し、光照射によるLeu-Leu-OMeの放出の効率は1よりかなり向上し計算量の80%となった。2をHL60細胞に加え培養しても形態変化がないことから2自体には細胞障害性がないことを確認した。一方、2とHL60の混合溶液を光照射すると、細胞の形態変化は1の同じ条件下に比べ効率よくおこり、Leu-Leu-OMe自体によるものとほぼ同程度であった。従って、2を用いることによりLeu-Leu-OMeによる細胞のアポトーシス誘発を光により制御出来ることが確かめられた。

研究成果

• [文献書誌] ODAKA,Furuta,Kobayashi,IWAMURA: "Synthesis,photorenativity and cytotoxic Activity of caged compormds of L-Leucyl-L-Leucine Methyl Ester,an Apoptosis Inducer" phtochemisty of photsbiology. 63(6). 800-806 (1996)
• [文献書誌] Furuta,Momotake,Sugimoto,Torigai,Hatayama,IWAMURA: "Acyloxycouonarinyl methyl caged CAMP,the photalabile and Mombrane-Pelmeable Derivative of cAMP that stimulates Pigment-Dispeision Responce" Biochemical and Biophysical Research Commun.228. 193-198 (1996)
• [文献書誌] Sakauchi,Furuta,Kobayashi,Iwamura: "Synthesis of cytotoxic studies of 5-O-(β-Glucopyranosyl)-2-Nitrobenzyl caged L-Leucyl-L-leucine Methyl Ester." Biochemical and Biophysical Res. Commun.(in press). (1997)