ツ-ハイブリッド系によるArnt及びPASタンパク質に結合する因子の単離

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08680672
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 十川 和博 東北大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (80175421)
• キーワード: タンパク-タンパク相互作用 / 転写因子 / コアクティベータ-

研究概要

ArntのC端末部に存在する転写活性化ドメインを除いた部分を、GAL4のDNA結合部位のC末端につなぎ、いわゆる、酵母のツ-ハイブリッドシステムを用いて、Arnt結合タンパク質をヒト胎児肝臓のcDNAライブラリーと、マウスリンフォーマのcDNAライグラリー、それぞれ約百万個ずつスクリーニングした。その結果ヒト胎児肝臓ライブラリーから4種の、マウスリンフォーマライブラリーから11種のクローンを得た。この中で既知のクローンは5種であった。HLHとPASドメインをもつクローンはなかった。Arntとの相互作用が比較的強い、有望と思われるものを選びさらに検討した。N末端部分がかけていたので、マウス脾臓cDNAライブラリーをスクリーニングし、full lengthのcDNAを得た。このcDNAクローンは534残基のアミノ酸からなるタンパク質をコードしていた。塩基性アミノ酸と酸性アミノ酸に富み、全体としてはプラスにチャージしていた。酵母で発現させその活性を調べたところ、AhリセプターとArntとの複合体の転写活性を、数倍強めることが分かった。またHIF-1aとArntとの複合体の転写活性も増強した。これらの結果は、見いだされたタンパク質が、Arnt依存性の転写を活性化するコアティベータ-であることを強く示唆する。ほ乳類培養細胞では、内在性の発現があるせいか現在までのところ、酵母で見られた活性は観察されていない。ノーザンブロッティングの結果、本遺伝子は全ての組織で発現していた。また細胞内局在を調べた結果、核に存在していることが分かった。

研究成果

• [文献書誌] Y. Kikuchi: "Purification and Characterization of the DNA-binding domain of BTEB, a GC-box binding transcription foctor expressed in Escherichia coli." J. Biochem.119. 309-313 (1996)
• [文献書誌] K. Hirose: "cDNA cloning and tissue-spacific expression of a novel bHLH/PAS factor (Arnt^2) with clone sequence Similarity to AbR nucleor translocator (Arnt)" Mol. Cell. Biol.16. 1706-1713 (1996)
• [文献書誌] M. Ema: "cDNA cloning of a murine homologe of drosophila single-mirded (sim), its mRNA expression in mouse development and chromosomal localization." Biochem. Biophys. Res. Commun.218. 588-594 (1996)
• [文献書誌] A. Kobayashi: "Cooperative interaction between AhR/Arat and Spt for the druginducible expression of CYP/A' gene." J. Biol. Chem.271. 12310-12316 (1996)
• [文献書誌] N. Murayama: "Distinct effects of phenoborbital and its N-methylated derivatiue on liver cytochrome induction" Arch. Biochem. Biophys.328. 184-192 (1996)
• [文献書誌] S. Kojima: "Transeriptional activation domain of human BTEB2, a GC box-binding factor." J. Biochem.121. 389-396 (1997)