1997 年度実績報告書

大腸菌DnaAタンパク質の機能構造の解析

研究課題

研究課題/領域番号	08680695
研究機関	九州大学
研究代表者	片山勉九州大学, 薬学部, 助手 (70264059)
キーワード	DNA複製 / ヌクレオチド結合 / タンパク質 / 細胞周期
研究概要	目的:DnaA蛋白質はATP/ADPと高親和性で結合する。ATP結合型には複製開始活性があるが、ADP結合型は不活性である。本研究の第1の目的は、ATP結合部位をアミノ酸レベルで同定し、蛋白質構造変化の機構を明らかにすることである。特に、ATPのガンマ位リン酸が相互作用するアミノ酸の同定は蛋白質活性化の機構を知るために最も重要である。第2の目的は、DnaA蛋白質の複製開始能およびその制御に必要なドメインの同定である。このために、複製開始が過剰に起こり致死性を示すようになったdnaA遺伝子変異株を分離しその蛋白質を生化学的に解析する。結果:ATPのガンマ位のリン酸修飾体を用いたアフィニティー・ラベル法により、415位のリジン残基がATPのガンマ位のリン酸と特異的に相互作用することが示唆された。次に、部位特異的変異導入法によって、この残基を他のアミノ酸と置換した変異体を作成し、その蛋白質を精製した。その結果、このアミノ酸が、ATPによる蛋白質活性化に必須であることが示された(投稿準備中)。一方、ランダム変異導入法によって、致死性を示すdnaA変異株を3種得ることができた。変異はいすれもDnaA蛋白質のATP結合ドメインとDNA結合ドメインの間の狭い領域に限定されていた。さらに、うち1種の変異体蛋白質は、ATPとの結合能を失っているにもかかわらず、複製開始能は保持していた。以上の結果は、この領域の構造がDnaA蛋白質の機能制御に重要であることを示し、蛋白質の構造機能相関を知る上で重要な知見である。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] 片山勉: "大腸菌染色体DNA複製の開始:DnaAと開始制御装置の機能" 細胞工学. 15・1. 23-31 (1996)
[文献書誌] 片山勉: "Disruption of the hs/Ugene,which encodes an ATPase subunit of the eukaryotic 26S proteasome homolog in Escherichia coli,suppresses the temperature-sensitive dnaA46 mutation." Biochem.Biophys.Res. Commun.255. 219-224 (1996)
[文献書誌] 片山勉: "The nucleoid protein H-NS facilitates chromosome DNA replication in Escherichia coli dnaA mutants." J.Bacteriol.178. 11512-11516 (1996)
[文献書誌] 片山勉: "Overinitiation of chromosome replication in the Escherichia coli dnaAcos mutant depends on activation of oriC function by the dam gene product." Mol.Microbiol.25. 661-670 (1997)
[文献書誌] 片山勉: "CedA is a novel Escherichia coli protein that activates the cell division inhibited by chromosomal DNA overreplication." Mol.Microbiol.26. 687-697 (1997)
[文献書誌] 窪田敏夫: "Conformational transition of DnaA protein by ATP:structural analysis of DnaA protein,the initiator of Escherichia coli chromosome replication." Biochem.Biophys.Res.Commun.232. 130-135 (1997)
[文献書誌] 黒川健児: "A stimulation factor for hydrolysis of ATP bound to DnaA protein,the initiator of chromosomal DNA replication in Escherichia coli." Biochem.Biophys.Res.Commun.(印刷中).

1997 年度 実績報告書

大腸菌DnaAタンパク質の機能構造の解析

研究代表者

片山 勉 九州大学, 薬学部, 助手 (70264059)

研究成果

[文献書誌] 片山 勉: "大腸菌染色体DNA複製の開始:DnaAと開始制御装置の機能" 細胞工学. 15・1. 23-31 (1996)

[文献書誌] 片山 勉: "Disruption of the hs/Ugene,which encodes an ATPase subunit of the eukaryotic 26S proteasome homolog in Escherichia coli,suppresses the temperature-sensitive dnaA46 mutation." Biochem.Biophys.Res. Commun.255. 219-224 (1996)

[文献書誌] 片山 勉: "The nucleoid protein H-NS facilitates chromosome DNA replication in Escherichia coli dnaA mutants." J.Bacteriol.178. 11512-11516 (1996)

[文献書誌] 片山 勉: "Overinitiation of chromosome replication in the Escherichia coli dnaAcos mutant depends on activation of oriC function by the dam gene product." Mol.Microbiol.25. 661-670 (1997)

[文献書誌] 片山 勉: "CedA is a novel Escherichia coli protein that activates the cell division inhibited by chromosomal DNA overreplication." Mol.Microbiol.26. 687-697 (1997)

[文献書誌] 窪田敏夫: "Conformational transition of DnaA protein by ATP:structural analysis of DnaA protein,the initiator of Escherichia coli chromosome replication." Biochem.Biophys.Res.Commun.232. 130-135 (1997)

[文献書誌] 黒川 健児: "A stimulation factor for hydrolysis of ATP bound to DnaA protein,the initiator of chromosomal DNA replication in Escherichia coli." Biochem.Biophys.Res.Commun.(印刷中).

1997 年度実績報告書

片山勉九州大学, 薬学部, 助手 (70264059)

[文献書誌] 片山勉: "大腸菌染色体DNA複製の開始:DnaAと開始制御装置の機能" 細胞工学. 15・1. 23-31 (1996)

[文献書誌] 片山勉: "Disruption of the hs/Ugene,which encodes an ATPase subunit of the eukaryotic 26S proteasome homolog in Escherichia coli,suppresses the temperature-sensitive dnaA46 mutation." Biochem.Biophys.Res. Commun.255. 219-224 (1996)

[文献書誌] 片山勉: "The nucleoid protein H-NS facilitates chromosome DNA replication in Escherichia coli dnaA mutants." J.Bacteriol.178. 11512-11516 (1996)

[文献書誌] 片山勉: "Overinitiation of chromosome replication in the Escherichia coli dnaAcos mutant depends on activation of oriC function by the dam gene product." Mol.Microbiol.25. 661-670 (1997)

[文献書誌] 片山勉: "CedA is a novel Escherichia coli protein that activates the cell division inhibited by chromosomal DNA overreplication." Mol.Microbiol.26. 687-697 (1997)

[文献書誌] 黒川健児: "A stimulation factor for hydrolysis of ATP bound to DnaA protein,the initiator of chromosomal DNA replication in Escherichia coli." Biochem.Biophys.Res.Commun.(印刷中).