|
分子シャペロンの分子種の多様性は、その機能における多様性を物語っていることは想像に難くない。本研究では、分子シャペロンの中でも哺乳類のDnaJホモログに着目し、二つの分子、Hsp40とHdj2の比較検討を行った。Hsp40とHdj2はHsc70のATPase活性あるいは、基質結合能を促進する効果においては同等であったが、当初の予想通り、それ自身の基質結合能においては顕著な差があり、Hsp40には認められない化学変性したロダネーゼの凝集を阻害する効果がHdj2では観察された。この結果を受けて、次に、高温下に基質結合能の増したHsp90に結合したルシフェラーゼのリフォールディング反応における両者の活性をHsc70と共に加えて調べたところ、むしろ、Hsp40の方がより効果的であることが判明した。しかしながら、そのリフォールディング反応には、Hsc70とHsp40だけでは不十分であり、極微量のウサギ網状赤血球ライセートの添加が不可欠であり、第三の因子の必要性が強く示唆された。そこで、その因子を網状赤血球ライセートから同定することを試みた。その結果、分子量約30Kのタンパク質が活性と共に濃縮されることが判明した。その後の解析の結果、それは非常に近接した二本のバンドであることが分かり、それぞれの内部アミノ酸配列(N末端アミノ酸はブロックされており配列の決定はできなかった)の決定から、プロテアソーム活性化因子PA28αとβであることが明らかになった。次に、ウシ血球からPA28複合体(PA28はαとβのへテロヘキサマーである)を精製し活性を測定したところ、Hsc70、Hsp40、PA28だけでルシフェラーゼのリフォールディングが確認された。
|
