動物卵成熟における卵成熟促進因子の形成・活性化機構

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08680784
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 山下 正兼 北海道大学, 大学院・理学研究科, 助教授 (30202378)
• キーワード: cdc2 / サイクリンB / MPF / 魚類 / 両生類 / 卵成熟 / 減数分裂 / リン酸化

研究概要

動物卵成熟における卵成熟促進因子(MPF)の形成・活性化機構を明らかにすることを目的に、以下の2点について調べた。
1)キンギョサイクリンの合成開始機構
mRNAの翻訳開始によるキンギョサイクリンの合成機構を探るため、ビオチン標識RNAアフィニティー精製法で得た、キンギョサイクリンBmRNA結合蛋白質のアミノ酸配列の決定を試みた。しかし、N末の化学的修飾と思われる理由のため、配列は決定できなかった。今後、これら蛋白質を蛋白質分解酵素で限定分解し、得られたペプチド断片のアミノ酸配列を決定する予定である。
2)アカガエルにおけるMPF形成・活性化機構
新規に作成したアカガエルサイクリンB1とB2に対する抗体とすでに作製済みのcdc2に対する抗体を用い、アカガエル卵成熟過程におけるcdc2、サイクリンB1、B2蛋白質の挙動を調べた。サイクリンB1、B2ともに末成熟卵には存在せず、卵核胞崩壊前に出現した。出現したサイクリンB1、B2は末成熟卵ですでに存在するcdc2と結合してMPFを形成した。cdc2とサイクリンBの複合体形成と同時に、cdc2は35kDから34kDに変化し、それと同時にMPF活性も上昇した。34kD cdc2のスレオニンに^<32>Pリン酸の取り込みが見られたことから、この分子量変化はスレオニンリン酸によるものと推測された。また、34kD cdc2は新規に作成した161番目のスレオニン(T161)がリン酸化されたcdc2を認識する抗体で認識された。以上のことから、アカガエル卵成熟においては、キンギョと同様、サイクリンBの合成、cdc2との複合体形成、T161リン酸化を経て、MPFは形成、活性化されると考えられる。

研究成果

• [文献書誌] Miura,Chiemi 他4名: "Hormonal induction of all stages of spermatogenesis in germ-somatic cell coculture from immature Japanese eel testis." Development, Growth & Differentiation. 38. 257-262 (1996)
• [文献書誌] Mineyuki,Yoshinobu 他3名: "A comparative study on stainability of preprophase bands by the PSTAIR antibody." Journal of Plant Research. 109. 185-192 (1996)
• [文献書誌] Haraguchi,Seiki 他6名: "Effects of phosphate on in vitro 2-cell block of AKR/N mouse embryos based on changes in cdc2 kinase activity and phosphorylation states." Biology of Reproduction. 55. 598-603 (1996)
• [文献書誌] Jiang,Jian-Qiao 他4名: "Organization of cytoplasmic microtubule during maturation of goldfish oocytes." Zoological Science. 13. 899-907 (1996)
• [文献書誌] Kyozuka,Keiichiro 他3名: "Change in intracellular Ca^<2+> is not involved in serotonin-induced meiosis reinitiation from the first prophase in oocytes of the marine bivalve C. gigas." Developmental Biology. 181(印刷中). (1997)
• [文献書誌] 山下正兼 他12名: "卵成熟「生殖細胞-形態から分子へ」" 岡田益吉、長濱嘉孝編著 共立出版, 223 (1996)