研究概要 |
ベータガラクトシダーゼの遺伝子LacZを組み込んだspleen necrosis virus(Mikawa et al,1991)を用い、internal ribosome entry sequence(IRES)を介してマーカーの上流に、(1)FGF1、(2)FGF受容体タイプ1、(3)FGF受容体タイプ1のチロシンキナーゼを取り除いた変異型を組み込んだ各種のプラスミドを作製し、トランスフェクション後、それぞれのウイルス産生細胞のクローニングを行った。D17細胞にウイルスを感染させ、二重免疫染色法にて(1)のウイルスが感染した細胞ではFGF1およびベータガラクトシダーゼの両方の発現が、(2)と(3)のウイルスが感染した細胞ではFGF受容体タイプ1およびベータガラクトシダーゼの両方の発現がおこっていることを確認した。ウエスターンブロットにて、(2)と(3)のウイルスの感染した細胞からFGF受容体タイプ1がタンパク量で内因性の50倍以上で発現し、(2)の野生型に比べ(3)の変異型ではチロシンキナーゼの分だけ、分子量が少なくなっていることも確認した。 上記の作製したウイルスを別々に、ニワトリ胎児(胎生2日目)の神経管内に微量注入し、視蓋の神経幹細胞に感染させ、FGFシグナルを変化させることで、胎生7日目までの発生経過にどんな影響が及ぶかを調べた。予備実験の結果であるが、ウイルス(1)およびウイルス(2)で感染したコロニーでは、細胞の脳表へ移動(migration)が抑制され、細胞が強く集合しあたかもcompactionを起こしているような形態を示した。(3)のウイルスで感染した細胞は、細胞分裂が抑制され、細胞数が少なく小さなコロニーを形成した。
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