神経分化に伴って誘導される転写因子のリン酸化酵素とシグナル伝達経路の研究

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08680852
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 研究機関: 理化学研究所
• 研究代表者: 平田 洋子 理化学研究所, 運動遺伝子研究チーム, フロンティア研究員 (50271523)
• 研究分担者: 木内 一壽 理化学研究所, 運動遺伝子研究チーム, チームリーダー (30135339)
• キーワード: NGFI-B kinase / Protein kinase C beta

研究概要

ラット脳(8-10週令、約60g)よりNGFI-B kinase Iを精製した。100,000xg上清をDEAE-Sephacel,Phenyl-Sepharose,Bio ScaleQ20,Superose6,NGFI-B327(O)-Sepharose(アフィニティークロマトグラフィー)によって約544倍に精製した。分子量は52kDaであった(p52NGFI-B kinase)。精製標品をSDS-PAGEで電気泳動後、PVDF膜にエレクトロブロッティングし、マイクロシークエンスによりN末端のアミノ酸配列を決定した。その結果、p52NGFI-B kinaseのN末端は、QGTKAPEXKTANTであり、この配列はプロテインキナーゼC betaの312残基めからに一致した。そこで、p52NGFI-B kinaseがプロテインキナーゼC betaのフラグメントであるか否かを調べるために、ウエスタンブロッティングを行った。プロテインキナーゼC beta1及びプロテインキナーゼC beta2のC末端抗体(Santa Cruz社)によって、p52NGFI-B kinaseは認識されたが、プロテインキナーゼCのhinge region(292-317残基)に結合するモノクロナル抗体(Santa Cruz社)では認識されなかった。これらの結果はp52NGFI-B kinaseがプロテインキナーゼC betaのC末端フラグメントであることを示唆している。これはプロテインキナーゼC betaのN末端側の調節ドメインを欠いたキナーゼドメインに相当し、従って、カルシウムイオンおよびホルボールエステルによる調節をうけない活性型であると考えられる。