抗酸化PC抗体を用いたLDLの酸化変性と泡沫細胞内酸化LDL代謝の解析

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08772108
• 研究機関: 帝京大学
• 研究代表者: 板部 洋之 帝京大学, 薬学部, 助手 (30203079)
• キーワード: 酸化LDL / 泡沫細胞 / 動脈硬化 / モノクローナル抗体 / 酸化PC / アルデヒドPC / 架橋蛋白質 / LCAT

研究概要

抗酸化LDLモノクローナル抗体DLH3は、アルデヒド基を含む9CHO-PCなどのPCの過酸化反応生成物をエプトープとし、免疫組織化学で病巣内のマクロファージ由来の泡沫細胞を顕著に染色する。また、この抗体を用いた酸化LDLの高感度定量法により腎透析患者血漿LDL酸化レベルが健常者の約8倍であることをすでに見出している。さらに今年度は、(1)低HDL血症を呈する遺伝性疾患であるLCAT欠損症患者の血漿LDL酸化レベルが健常者の約3.5倍であることを見出した。LCATに酸化PCを代謝する活性のあることも見出し、LCATが血漿LDL酸化変性防御因子としての役割のあることが示唆された。(2)DLH3と同様にヒト粥状硬化病巣ホモジェネートを免疫源として作製したモノクローナル抗体DLH2が、架橋蛋白質を認識することを確かめた。ヒト動脈硬化病巣をこのDLH2抗体で免疫染色すると、泡沫化したマクロファージおよびその周囲の細胞外マトリックスが陽性となり、病巣中に架橋変性を受けた蛋白質が存在することが示唆された。(3)J774マクロファージ細胞に、未処理LDL、アセチルLDL、酸化LDLを1時間取り込ませた後、細胞内での各LDLの残存量の経時変化をヒトアポBに対するサンドイッチELISAで調べた。LDLとアセチルLDLは速やかに減少(半減期30分)した。酸化LDLは半減期約90分と少し代謝速度は遅かったが、24時間後にはほとんど細部内から消失した。酸化LDLもマクロファージに取り込まれた後に完全に代謝されるのか、さらに検討中である。(4)J774マクロファージ細胞にリポ蛋白質除去血清存在下でスフィンゴンシンを加えて24時間培養すると、DLH3の免疫染色陽性になることが見いだされた。何らかの細胞刺激に伴って、おそらくリポ蛋白質には依らず、細胞膜リン脂質の酸化変性が起こりうる可能性が考えられた。現在、この様な変化を起こす条件、細胞の種類、生じた抗原の性質などを検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Hiroyuki Itabe,et al.: "Oxidized phosphatidylcholines that modify proteins. Analysis by monoclonal antibody against oxidized low density lipoprotein." Journal of Biological Chemistry. 271. 33208-33217 (1996)
• [文献書誌] Edwin Kaiserling,et al.: "Lipid islands in human gastric mucosa : Morfological and immunohistochemical findings." Gastroenterology. 110. 369-374 (1996)
• [文献書誌] Masahiro Mori,et al.: "Characterization of vitronectins in atherosclerotic lesions." Journal of Atherosclerosis and Thrombosis. 3. 25-31 (1996)
• [文献書誌] Osamu Tamai,et al.: "Single LDL apheresis improves endothelium-dependent vasodilatation in hypercholesterolemic humans." Circulation. 95. 76-82 (1997)
• [文献書誌] 今中常雄 他: "動脈硬化認識モノクローナル抗体とその抗原解析" 動脈硬化. 23. 351-355 (1996)
• [文献書誌] 高野達哉 他: "過酸化リポタンパク質と動脈硬化の発症" Progress in Medicine. 16. 1228-1230 (1996)