可溶性MHC/ペプチド複合体を用いたin vitro胸腺内T細胞分化モデルの樹立

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08839017
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 応募区分: 時限
• 研究機関: 九州大学
• 研究代表者: 福井 宣規 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (60243961)
• 研究分担者: 上川路 信博 九州大学, 生体防御医学研究所, 助手 (90224659)
• キーワード: MHC / ペプチド複合体 / T細胞受容体 / GPI / in vitro / T細胞分化

研究概要

glycosyl-phosphatidylinositol(GPI)anchorをもつ蛋白質は細胞と培養することにより、細胞膜にとりこまれ細胞表面に発現するという特徴を有する。胸腺内T細胞分化におけるTCR・MHC/ペプチド相互作用をin Vitroで解析し得るassay系を樹立する目的で、MHCクラスII分子/ペプチド複合体をCPIアンカー型分子として発現させ、その可溶性formを精製した。可溶性GPIアンカー型MHCクラスII/ペプチド複合体をCHO細胞と培養することにより、この複合体に特異的な単クローン抗体で染色される細胞表面での発現を認めたが、この'protein transfer'により複合体は特異的T細胞ハイブリドーマを活性化し得なかった。しかしながら、MHCクラスI、クラスII分子欠損マウス由来の胸腺上皮細胞株に'protein transfer'後、CD4^-CD8^-T細胞と培養することにより、CD4^+CD8^-T細胞への分化が観察された。
以上より、T細胞の活性化にはTCRのaggregationが必要であるが、分化には必須でないことが示唆され、この実験系がin vitroでT細胞分化におけるTCR・MHC/ペプチド複合体相互作用を解析するよいモデルになる可能性を示した。この分化したCD4^+CD8^-T細胞が真にこの複合体により正に選択されたものであるというevidenceは、この複合体を単一MHCクラスII/ペプチド複合体として発現したトランスジェニックマウスの解析結果と比較することで検討する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Fukui Y.: "Positive and negative CD4^+ themocyte selection by a single MHC class II/peptide ligand in vivo affected by its expression level" Immunity. (in press).
• [文献書誌] Takeshita T.: "Identification of HLA-DQ6-derived peptide recognized by mouse MHC class I H-2D^b-restricted CD8^+ T cells in HLA-DO6 transgenic mice" Jpn.J.Human Genet.(in press).
• [文献書誌] Hori T.: "Japanese cedar pollinosis and HLA-DP5." Tissue Antigens. 47. 485-491 (1996)
• [文献書誌] Mori K.: "Persistent elevation of immunoglobulin G titer against the C region of recombinant group A streptococcal M protein in patients with rheumatic fever." Pediatric Research. 39. 336-342 (1996)
• [文献書誌] Min W.: "Identification of an epitope for T cells correlated with antibody response to hepatitis B surface antigen in vaccinated humans." Human Immunol.46. 93-99 (1996)