1996 年度実績報告書

テトラヒメナの新しいCa^<2+>結合蛋白質の研究

研究課題

研究課題/領域番号	08874118
研究機関	筑波大学
研究代表者	沼田治筑波大学, 生物科学系, 助教授 (50189354)
キーワード	テトラヒメナ / カルシウムイオン / カルモデュリン / ダイニン / 繊毛 / 細胞骨格
研究概要	本研究はテトラヒメナの3種類のCa^<2+>結合蛋白質(分子量23,000と25,000のテトラヒメナCa^<2+>結合蛋白質[TCBP-23とTCBP-25]とカルモデュリン)の機能を解明することによって「Ca^<2+>が関与する生命現象がCa^<2+>結合蛋白質の分業体制によって制御されている。」という仮説を検証することを目的とする。本年度は次の実験を行った。 (1)TCBP-23とTCBP25の細胞内機能を明らかにするために、これらの蛋白質に結合する蛋白質をゲルオーバーレイ法で検討した。その結果、テトラヒメナの膜の裏打ち構造であるエピプラズマの主要蛋白質である分子量116,000(p116)と130,000(p130)の蛋白質がCa^<2+>依存的にTCBP-23やTCBP-25に結合することが判った。現在、p116とp130の精製を行っている。 (2)繊毛運動のCa^<2+>制御とカルモデュリンの関係を調べるため、テトラヒメナ・カルモデュリンの大量調製法を開発し、カルモデュリンのアフィニティーカラムを作成した。これを用いて、繊毛の膜分画、ダイニン分画各々にカルモデュリン結合蛋白質が存在するかどうかを検討した。その結果、繊毛の膜分画の分子量3万の蛋白質がCa^<2+>依存的にカルモデュリンに結合することが判った。 (3)TCBP-23とTCBP-25の遺伝子破壊を行うためのtargeting vectorsの作成を行った。現在これらのvectorsをテトラヒメナ細胞に導入して遺伝子破壊を試みている。

研究成果
(7件)

すべてその他

すべて文献書誌 (7件)

[文献書誌] Kurasawa,Y.,Hanyu,K.,Watanabe,Y.and Numata,O: "F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α is regulated by Ca^<2+>/calmodulin." J.Biochem.Vol.119. 791-798 (1996)
[文献書誌] Hanyu,K.,Numata,O.,Takahashi,M.and Watanabe,Y: "Immunofluorescence localization of a 23-kDa Tetrahymena calcium-binding protein,TCBP-23,in the cell cortex." J.Biochem.Vol.119. 914-919 (1996)
[文献書誌] Kurasawa,Y.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Characterization of F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α investigated with rabbit skeletal muscle actin." Zool.Sci.Vol.13. 371-375 (1996)
[文献書誌] Kato,M.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Tetrahymena nuclear proteins that bind to a micronucleus-specific sequenceduring vegetative growth." Zool.Sci.Vol.13. 527-531 (1996)
[文献書誌] Numata,O.,Yamazaki,A.and Watanabe,Y: "Tetrahymena 14-nm filament protein (49K protein) and citrate synthase are expressed by the same gene." Europ.J.Protistol.Vol.32 Suppl.1. 108-113 (1996)
[文献書誌] Kanzawa,N.,Numata,O.,Watanabe,Y.and Maruyama,K: "Identification and characterization of Tetrahymena myosin." Comp.Biochem.Physiol.Vol.115B. 547-551 (1996)
[文献書誌] Watanabe,Y.,Hanyu,K.,Takemasa,T.and Numata,O: "TCBP-25.In Guidebook to the Calcium Binding-Proteins (Celio,M.R ed.)" Sambrook and ToozePublication at Oxford University Press, 4 (1996)

1996 年度 実績報告書

テトラヒメナの新しいCa^<2+>結合蛋白質の研究

研究代表者

沼田 治 筑波大学, 生物科学系, 助教授 (50189354)

研究成果

[文献書誌] Kurasawa,Y.,Hanyu,K.,Watanabe,Y.and Numata,O: "F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α is regulated by Ca^<2+>/calmodulin." J.Biochem.Vol.119. 791-798 (1996)

[文献書誌] Hanyu,K.,Numata,O.,Takahashi,M.and Watanabe,Y: "Immunofluorescence localization of a 23-kDa Tetrahymena calcium-binding protein,TCBP-23,in the cell cortex." J.Biochem.Vol.119. 914-919 (1996)

[文献書誌] Kurasawa,Y.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Characterization of F-actin bundling activity of Tetrahymena elongation factor 1 α investigated with rabbit skeletal muscle actin." Zool.Sci.Vol.13. 371-375 (1996)

[文献書誌] Kato,M.,Watanabe,Y.and Numata,O: "Tetrahymena nuclear proteins that bind to a micronucleus-specific sequenceduring vegetative growth." Zool.Sci.Vol.13. 527-531 (1996)

[文献書誌] Numata,O.,Yamazaki,A.and Watanabe,Y: "Tetrahymena 14-nm filament protein (49K protein) and citrate synthase are expressed by the same gene." Europ.J.Protistol.Vol.32 Suppl.1. 108-113 (1996)

[文献書誌] Kanzawa,N.,Numata,O.,Watanabe,Y.and Maruyama,K: "Identification and characterization of Tetrahymena myosin." Comp.Biochem.Physiol.Vol.115B. 547-551 (1996)

[文献書誌] Watanabe,Y.,Hanyu,K.,Takemasa,T.and Numata,O: "TCBP-25.In Guidebook to the Calcium Binding-Proteins (Celio,M.R ed.)" Sambrook and ToozePublication at Oxford University Press, 4 (1996)

1996 年度実績報告書

沼田治筑波大学, 生物科学系, 助教授 (50189354)