宿主認識に関与する特異的蛋白質のデザインとデザイン蛋白質による抵抗性の誘導

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08876063
• 研究機関: 東北大学
• 研究代表者: 羽紫 輝良 東北大学, 農学部, 助教授 (20189476)
• キーワード: 拮抗タンパク質 / 宿主認識遺伝子 / ロイシンリッチリピート / LRR

研究概要

A.拮抗タンパク質因子の作製
新規タンパク質のC末端側に存在するロイシンリッチリピート(LRR)L--L--L--L-Lはタンパク質どうしの相互作用およびシグナル伝達に重要な構造であることから、LRR数個連結した変異タンパク質の作製を行った。新規タンパク質のLRRはL__-SGL__-DRL__-PL__-EPPKV__-Aであり(下線部はロイシンを示す)、4番目のLの次のアミノ酸までの塩基配列はCTT|AGC|GGC|CTA|GAC|CGT|CCT|TTG|GAAで示される。4個のロイシンを含む30塩基までを合成した次に、新規タンパク質のC末端部LSGLDRLPLEの次に合成したLRRを2,3,4,5,6個それぞれ連結させた。連結した5個の遺伝子は、発現ベクターpGEX-2Tを用い、マルチクローニングサイトに挿入できるようデザインし、連結した。
B.新しい機能を有するタンパク質の生産
宿主大腸菌(MN522)のコンピテントセルに、目的の遺伝子を連結させたpGEX-2Tを加え、形質転換を行った。発現した融合タンパク質はGST-glutathione affinity systemに基づいて精製した。精製融合タンパク質は次年度抗性の誘導試験に共するために-80°Cに保存した。

研究成果

• [文献書誌] K. Katsura et al.: "The complete nucleotide sequence and characterization of the linear DNA plasmids pRS64 from the plant pathogeic fungus Rhizoctonia solani." Curr. Genet.30. (1997)
• [文献書誌] 羽紫 輝良: "植物感染生理の新展開." 植物防疫. 51 (5). (1997)
• [文献書誌] 桂 幸次他: "菌類のプラスミドDNA." 日菌報. 38 (1). (1997)
• [文献書誌] N. Narisawa et al.: "Suppression of clubroot formation in chinease cabbage by root endophytic fungi, Heteroconium chaetospira." Plant Pathology. 46. (1997)
• [文献書誌] N. Narisawa et al.: "Clubroot formation factors of plasmodiophora brassicae with resting spore inoculation." Mycological Res.101. (1997)
• [文献書誌] T. Hashiba et al.: "Fungal Cells in biodefence mechanism." Sai Kon Publishers, (1997)
• [文献書誌] T. Hashiba et al.: "Rhizoctonia Species : Toxonomy, Molecular Biology, Ecology, Pathology and Disease Control." Kluwer Academic Publishers, 578 (1996)