難治性の繊維性良性腫瘍(デスモイド腫瘍)の再発を規定する特異遺伝子の同定

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08877040
• 研究機関: 東海大学
• 研究代表者: 玉置 憲一 東海大学, 医学部, 教授 (50055860)
• 研究分担者: 山崎 等 東海大学, 医学部, 講師 (20191273) ; 中村 雅登 東海大学, 医学部, 講師 (00164335) ; 上山 義人 東海大学, 医学部, 助教授 (30072408)
• キーワード: 良性腫瘍 / 線維性腫瘍 / 難治性 / 再発 / 特異遺伝子 / ポジショナルクローニング

研究概要

近年、癌におけるgenetic instability(遺伝的不安定性)の頻度がきわめて高いことが報告されており、癌においては“無制限の増殖"という本質以外に、転移能の獲得のように二次的、三次的に遺伝子上の変化が加わっていることが示唆されている。このような背景から、真の意味で腫瘍発生初期の遺伝的な変化(原因となる変化)を検索するためには、細胞の無制限の増殖を示すが転移せず、形態学的にも不揃いのない良性腫瘍での遺伝子異常の解析が必要と考えられる。
本年度の研究では、正常の線維芽細胞に対して良性・再発性の線維腫瘍のデスモイド腫瘍で、特異的に発現が増加・減少する遺伝子産物をRAP(RNA fingerprinting by arbitrarily primed PCR)法を用いてスクリーニングした。デスモイドの増殖形式は浸潤性で周囲正常部との境界が不明瞭であり、摘出材料は詳細に病理組織学的に検索された。腫瘍の一部は免疫不全動物(SCIDマウス)への移植を試み、残りの材料を以下の分子生物学的解析に用いた。腫瘍組織及び正常組織より全RNAを抽出し、任意プライマー(20mer)を用いてRT-PCRを行った。反応産物をキャピラリー電気泳動装置(ABI PRISMTM genetic analizer)を用いて分離し、腫瘍特異的に発現が増加・減少しているピークを同定した。RT-PCR産物をポリアクリルアミドゲル電気泳動を用いて分離し、特異的ピーク相当部を切り出し、ゲルよりDNAを抽出し、同じプライマーを用いたPCRで再増幅した後T-ベクターにクローニングした。現在、目的のピークに対応するクローンをgenetic analizerで確認し、遺伝子配列を決定し既知の遺伝子と比較・検討中である。

研究成果

• [文献書誌] Yoshiyuki Abe,Hitoshi Yamazak Norikazu Tamaoki,et al.: ""Advantage of in vivo chemosensitivity assay to detect vincristine resistance in a human epidermoid carcinoma xenograft"" Anticancer Research. 16. 729-734 (1996)
• [文献書誌] Yoshiyuki Abe,Yasyuki Ohnishi Norikazu Tamaoki,et al.: ""P-glycoprotein-mediated acquired multidrug resistance of human lung cacncer cells in vivo"" British Journal of Cancer. 74. 1929-1934 (1996)
• [文献書誌] Masato Nakamura,Yoshiro Oshika Norikazu Tamaoki,et al.: ""Gene expresstion of granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) in non-small cell lung cancer"" Anticancer Research. 17 (in press). (1997)
• [文献書誌] Yoshiyuki Abe,Yoshiro Oshika Norikazu Tamaoki,et al.: ""A xenograft line of human teratocarcinoma established by serial transplantation in severe combined immunodeficient (SCID) mice"" APMIS. 105 (in press). (1997)
• [文献書誌] Yukihito Takamiya,Yoshiyuki Abe Norikazu Tamaoki,et al.: ""Murine P-glycoprotein on stromal vessels mediates multidrug resistance in intracerebral human glioma xenografts"" British Journal of Cancer. (in press). (1997)