Yeast One Hybrid法によるJC virus複製機構の検討

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08877044
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 長嶋 和郎 北海道大学, 医学部, 教授 (50010377)
• 研究分担者: 田中 伸哉 北海道, 医学部, 助手 (70261287) ; 澤 洋文 北海道, 医学部, 講師 (30292006)
• キーワード: JCウイルス / NF-1 / 転写因子 / Callular tropism / microinjection / regulatory region / PML / 髄液診断

研究概要

1.Clontech(Palo Alto,CA)社のyeast one-hybrid system)を用いてJC virus NF-1領域に特異的に結合する蛋白を同定した。NF-1配列を用いたスクリーニングで30個の陽性クローンから4個はこれまでにdata baseに登録されていない未知遺伝子であったためにこのDNA配列を確認し、NF-1/Xをcloningし、その発現が脳に多いことを示した。
2.ヒトに無症候性に感染し、常時尿に排泄されている型Archetype JC virusであるCY株(調節領域が原始型)がCOS-7細胞で増殖することを見いだし、この細胞を用いた解析系を樹立した。Mad-1(調節領域がPML型)と調節領域をCYに変えたキメラウイルスCY/Mad-1で感染性を調べ、cellular tropsimに調節領域が関与していることを示した。
3.Microinjection法により非感受性細胞であるCOS7でも細胞膜を越えてvirusを注入するとvirusの増殖が見られることから、virus感染に細胞膜因子が存在することを示唆した。
4.過去2年間に日本国内にて発症が確認されたPMLの5症例のregulatory regionを解析し、4例のPML型と1例のArchetype JCの症例を見い出し、報告した。またPMLの髄液を用いたPCRによる診断方法を確立した。

研究成果

• [文献書誌] Shishido Y, et al.: "Assembly of JC virus-like particles in COS7 cells." J Med Virol. 51. 269-277 (1997)
• [文献書誌] Kato A, et al.: "Lack of evidence fof the transmission of JC polyoma virus between human populations." Arch Virol. 142. 875-882 (1997)
• [文献書誌] Shinohara T, et al.: "Propagation of the human polyomavirus,JCV,in human neuroblastoma cell lines." Virology. 228. 269-277 (1997)
• [文献書誌] Nagashima K, et al.: "Analysis of and the role of the requlatory region of archetype (CY) and PML type of JC virus in determining cellnlartropism." Neurovirology. 3. 92- (1997)
• [文献書誌] Nagashima K, et al.: "Analysis of the regulatory region and DNA binding factors of JC virus in determining cellular tropism." Brain Pathol. 7. 1322- (1997)
• [文献書誌] Sugimoto C, et al.: "Amplification of JC virus regnlatory DNA sequences from cerebrospinal fliud : diagnostic value of PML" Arch Virol. 143. 249-262 (1998)