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本研究では、多核球とキニン系とが連動して血管透過性を亢進しているか否かを検討するが、この際、モルモットを実験動物として使用する。これは、キニン系3因子の一つであるハ-ゲマン因子ついて、モルモット分子の構造解析が、蛋白及びcDNAレベルでヒト分子と同様に進んでいるためである。そこで、本年度は残りの2因子のうちまずプレカリクレインについて同様の解析を行った。プレカリクレイン分子をモルモット血漿より精製し、その部分アミノ酸配列を決定すると共に、活性化を受ける際の限定水解部位を同定した。次に、モルモット肝からcDNAライブラリーを作成し、そこからプレカリクレインの全長をコードするcDNAをクローニングして、全塩基配列とそれに基づくアミノ酸配列を決定した。これと平行して、精製プレカリクレインをウサギに感作して抗体を作成し、IgG分画を調整した。
次に、第3の因子である高分子キニノーゲンについては、これをモルモット血漿より精製し、ヤギに対して抗体を作成し、IgG分画を調整した。一方、ラット高分子キニノーゲンcDNAを入手し、これにジゴキシゲニンを標識してハイブリッド法用のプローブを調整した。現在、モルモット肝cDNAライブラリーから高分子キニノーゲンcDNAのクローニングを進めている。
次年度は、主としてキニン系各因子に対する抗体を用いて、本研究のゴールである多核球との連携作用解明を進める計画である。
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