歯周病原菌感染予防DNAワクチンの検討

1996 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 08877279
• 研究機関: 東京歯科大学
• 研究代表者: 奥田 克爾 東京歯科大学, 歯学部, 教授 (40085741)
• 研究分担者: 三浦 直 東京歯科大学, 歯学部, 助手 (10266570) ; 石原 和幸 東京歯科大学, 歯学部, 講師 (00212910) ; 加藤 哲男 東京歯科大学, 歯学部, 助教授 (00159253)
• キーワード: 歯周病 / Actinobacillus actinomycetemcomitans / 線毛タンパク / クローニング / DNAワクチン / 付着阻止 / プラスミド / 分泌型IgA

研究概要

歯の喪失をもたらす歯周炎の病原菌は、歯周局所に増加するグラム陰性桿菌とスピロヘータなどである。なかでもPorphyromonas gingivalisとActinobacillus actinomy-cetemcomitansは、線毛などの付着因子で局所に定着し、内毒素や種々の酵素などで歯周病原性を発揮する。本研究は両菌種の付着因子を不活性化するDNAワクチンの開発に関わる基礎的解析を行うことを目的とした。最初にA.actinomycetemcomitansの線毛あるいは線毛形成に関わる遺伝子のクローニングを試みた。A.actinomycetemcomitansの線毛を分離しN末端から41番目までのアミノ酸配列を読み取ることができた。このアミノ酸配列に基づいて作成した複数のオリゴヌクレオチドをプローブとして用い、このN末端からのコード領域をPCR法によって増幅した。その後、A.actinomycetemcomitansの線毛抗原のN末端とC末端をPfuDNAポリメラーゼとpCR-Scriptを用いてクローニングした。A.actinomycetemcomitans線毛DNAはfap(fimbriae associated protein)としたDNAシークエンスおよびアミノ酸配列を決定した結果、fap遺伝子は228bpから成り、76のアミノ酸をコードし、分子量は7970.74であった。現在このfap遺伝子、サイトメガロウィルスの細胞侵入性遺伝子などを組み込んだプラスミドへの組み込みを試みている。

研究成果

• [文献書誌] Ishihara,K.et al: "Characterization of Trepcicena dentlcoka prt P gene encoding prolyl-phanglnlaning-specifiy protsize (denrilisin)" Infection and Immurity. 64. 5178-5186 (1996)
• [文献書誌] Kato,T.et al: "Isolation and characterization of fcanolysin genes from Actinobacillus actinomycetemcomitans" FEMS Microbiology Letters. 143. 217-221 (1996)
• [文献書誌] Kimizuka,R.et al: "Characterization of Actinobacillus actinomycetemcomitans tuniclysin" Microbiology and Immunology. 40. 717-723 (1996)
• [文献書誌] Kato,T.et al: "Identijication of a chreincsomalley encoded Kanamycin iicetylase in Pirptiymmanas ginjirvales" FEMS Microbiology Letters. 131. 301-306 (1995)
• [文献書誌] Nakagawa,T.et al: "Pelative arctibothil in sera from Pcrphuysitaitas glng antigers" Jurnal of Roriodental Rusenreh. 30. 396-403 (1995)
• [文献書誌] Sueki,Y.et al: "Inhibitory effects of funoran an the adhexince and colonization of multins strestocecci" Caries Research. 30. 119-125 (1995)
• [文献書誌] 奥田克爾: "口腔の感染症とアレルギー" 一世印刷出版, 315 (1996)
• [文献書誌] 奥田克爾 共著: "歯周病学" 永末書店, 296 (1996)