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2008 年度 実績報告書

マイクロ流体デバイスを用いたアプタマーの1分子スクリーニングシステムの開発

研究課題

研究課題/領域番号 08J09830
研究機関東京大学

研究代表者

杉野 弘和  東京大学, 大学院・薬学系研究科, 特別研究員(DC2)

キーワードデバイス / チップ / ソーター / マイクロ / 分子 / 分離 / スクリーニング / アプタマー
研究概要

蛍光標識DNAを、分子ソーターにより分離することに成功した。まず、ビオチンとストレプトアビジンとの結合を利用し、ビオチン化したβ-ACTINおよびGAPDHの遺伝子を、ストレプトアビジンをコーティングした2種類の量子ドット(Em.655nm、Em.565nm)で標識した。β-ACTINをマイクロ流体チップに流し、655nmの蛍光波長を指標にβ-ACTIN遺伝子を蛍光検出できることを確認した。各DNAを混合してマイクロ流体チップに流し、β-ACTIN遺伝子DNAのソーティングを行った。分離後、回収した試料溶液に含まれるβ-ACTINおよびGAPDH遺伝子の割合を定量PCR法により調べた結果、β-ACTINの遺伝子の割合が分離前に比べて増加したことが確認された。この実験により、量子ドットで標識したDNAが分子ソーターにより分離可能であることが示された。この成果は、標的タンパク質と相互作用するアプタマーを1分子レベルでスクリーニングための基礎技術が完成したことを意味する。現在は、標的タンパク質を分離する際に、そのタンパク質と結合するアプタマー配列のRNAも同時に分離するためにシステム構築に取り組んでいる。
また、マイクロ流体チップ内を流れる複数種類の標的を、各標的を標識した蛍光タンパク質のスペクトル特性の違いから区別し、チップ内の異なる分岐へと分離する技術を開発した(Lab on a Chip誌に掲載予定)。この分離技術により、4種類の蛍光ビーズおよび3種類の大腸菌をソーティングすることに成功した。この技術が持つ特定の蛍光スペクトルを区別できる特性を利用し、蛍光タンパク質をチップ内で分子進化させるオンチップシステムを開発する予定である。

  • 研究成果

    (4件)

すべて 2008

すべて 学会発表 (4件)

  • [学会発表] 細胞・生体分子の高精度一括分離システム2008

    • 著者名/発表者名
      尾崎和人
    • 学会等名
      第18回化学とマイクロ・ナノシステム研究会
    • 発表場所
      京都
    • 年月日
      2008-12-08
  • [学会発表] PDMSチップのワンステップ3次元鋳造加工と温度感受性ハイドロゲルによる哺乳類細胞の分離2008

    • 著者名/発表者名
      白崎善隆
    • 学会等名
      第46回生物物理学会年会
    • 発表場所
      福岡
    • 年月日
      2008-12-03
  • [学会発表] HIGH PERFORMANCE PARALLEL BIOPARTICLE SORTER WITH 3-DIMENSI0 NAL PDMS CHIP2008

    • 著者名/発表者名
      Hirokazu Sugino
    • 学会等名
      Micro Total Analysis System 2008
    • 発表場所
      San Diego, CA, USA
    • 年月日
      2008-10-14
  • [学会発表] HIGH PERFORMANCE MULTIPLE BIOMOLECULES SORTING SYSTEM2008

    • 著者名/発表者名
      Kazuto Ozaki
    • 学会等名
      Micro Total Analysis System 2008
    • 発表場所
      San Diego, CA, USA
    • 年月日
      2008-10-13

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公開日: 2010-06-11   更新日: 2016-04-21  

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