糸状菌におけるタンパク質の糖鎖修飾とその意義

1998 年度 研究成果報告書概要

• 研究課題/領域番号: 09044214
• 研究種目: 国際学術研究
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 共同研究
• 研究分野: 応用微生物学・応用生物化学
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 塚越 規弘 名古屋大学, 農学部, 教授 (50115599)
• 研究分担者: HEMMING F.W. ノッチンガム大学, 生化学部, 教授 ; PEBERDY J.F. ノッチンガム大学, 生命科学部, 教授 ; 加藤 雅士 名古屋大学, 農学部, 助手 (70242849) ; 小林 哲夫 名古屋大学, 農学部, 助教授 (20170334) ; JOHN F. Peberdy NOTTINGHAM UNIV., DEPT.OF LIFE SCIENCE,PROFESSOR ; FRANK W. Hemming NOTTINGHAM UNIV., DEPT.OF BIOCHEMISTRY,PROFESSOR
• 研究期間 (年度): 1997 – 1998
• キーワード: A.Oryzae / A.nidulans / タカアミラーゼA(TAA)糖鎖 / AoTAA糖鎖 / AnTAA糖鎖 / Difference in glycosylation between A.oryzae and A.nidulans

研究概要

酵素機能の発現制御ならびに酵素タンパク質の分泌過程における糖鎖修飾機構をタカアミラーゼAをモデル酵素に用いて、分子生物学的・生化学的に解析し、糖鎖修飾の意義を解明することを目的に共同研究を行った。以下に昨年度の研究成果に基づき、本年度実施した研究成果を記す。
1. A.oryzaeのタカアミラーゼA(AoTAA)およびAoTAA遺伝子で形質転換したA.nidulansが分泌生産するタカアミラーゼA(AnTAA)の精製:市販のAoTAA酵素標品をゲル濾過(Superdex 200HR)等により精製を行い、糖鎖解析に耐えうる好純度の酵素標品を得た。また、AnTAAについてもゲル濾過およびイオン交換カラムクロマトグラフィーを使用して昨年度以上に精製し、高純度の酵素標品を調製した。
2. レクチンの反応性による糖鎖構造の解析:上記精製酵素について種々のレクチンとの反応性を調べた結果、AnTAAはAoTAAと同様にマンノースを構成糖として含有する糖鎖修飾を受けていることが明らかにされた。しかし、この解析過程で、極めて低分子量の高度に糖鎖修飾された物質が混入していることを発見した。アンペロメトリー法による構成糖組成の解析を昨年同様に行う前にこの混入物質を取り除くことが必須となり、様々な分離方法を試みたが、現在までのところ、取り除く事に成功していない。従って、アンペロメトリー法による構成糖組成の解析を実施することができなかった。しかし、蛍光標識法による糖鎖構造の解析結果は昨年度の結果と同一であり、AoTAAは7個、AnTAAは8個の構成糖よりなる糖鎖で主として修飾されていると結論された。

研究成果

• [文献書誌] Masashi Kato: "An Aspergillus nidulans nuclear protein, AnCP, involved in enhancement of Taka-amylase A gene expression,binds to the CCAAT-containing taaG2, amdS and gatA promoters." Mol.Gen.Genet.254. 119-126 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Masashi Kato: "The Aspergillus nidulans CCAAT-binding factor, AnCP/AnCF, is a heteromeric protein analogous to the HAP complex of Saccharomyces cerevisiae." Mol.Gen.Genet.257. 404-411 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Norihuki Kitamoto: "Utilization of the TEF1-α gene (TEF1) promoter for expression of polygalacturonase genes, pgaA and pgaB, in Aspergillus oryzae." Appl.Microbiol.Biotechnol.50. 85-92 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kayoko Takeda: "Cloning of a thermostable ascorbate oxidase from Acremonium sp.HI-25 and modification of the azide sensitivity of the enzyme by site-directed mutagenesis." Biochimica Biophysica Acta. 1388. 444-456 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kayoko Takeda et al: "Cloning of a thermostable ascorbate oxidase gene from Acremonium sp.HI-25 and modification of the azide sensitivity of the enzyme by site-directed mutagenesis." Bichim.Biophys.Acta. 1388. 444-456 (1398)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Masashi Kato et al.: "An Aspergillus nidulans nuclear protein, AnCP,involved in enhancement of Taka-amylase A gene expression, binds to the CCAAT-containg taaG2, amdS and gatA promoters" Mol.Gen.Genet.254. 119-126 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Masashi Kato et al.: "The Aspergillus nidulans CCAAT-binding factor, AnCP/AnCF,is a heteromeric protein analogous to the HAP complex of Saccharmyces cerevisiae." Mol.gen.Genet.257. 404-411 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Noriyuki Kitamoto et al.: "Utilization of the TEF1-alpha gene (TEF1 )promoter for expression of polygalacturonase genes, pgaA and pgaB,in Aspergillus oryzae." Appl.Microbiol.Biotechnol.50. 85-92 (1998)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より