ヘリコバクター・ピロリのADP-リボシル化酵素の病原性に関する共同研究

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09044322
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 平山 壽哉 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (50050696)
• 研究分担者: MOSS Joel 米国国立衛生研究所, 部長 ; 和田 昭裕 長崎大学, 熱帯医学研究所, 助手 (70253698) ; 野田 公俊 千葉大学, 医学部, 教授 (60164703)
• キーワード: ヘリコバクター・ピロリ / ADP-リボシル化酵素 / 細菌毒素 / 病原因子 / 細菌感染症

研究概要

我々は、ヘリコバクター・ピロリの菌体画分にmono-ADP-ribosyltransferase(ART)活性が存在することを示し、このARTが分子量約7万の蛋白質(P70)をADP-リボシル化することを明らかにしている。本年度は、P70のどのアミノ酸が修飾を受けているのかを検討した。
[32P]NADを基質としてP70に取り込ませた放射活性は、Hydroxylamine処理で遊離した。これは、ARTによってADP-リボシル化されたP70のアミノ酸はアルギニン(Arg)であることを示唆していた。P70をADP-リボシル化する反応液中にArgやArg類似体であるアグマチン(Agm)を加えると、濃度依存性にP70のADP-リボシル化が阻害された。P70のADP-リボシル化をほぼ90%阻害する濃度のAgm存在下では、Agm自体が強くADP-リボシル化されており、Agmを基質としてART活性を測定する方法、アグマチンアッセイが本菌のART活性を測定する際に利用できることが判った。LysateをSuperose 12カラムを用いたFLPCで分画後、得られた画分のART活性をアグマチンアッセイで測定すると、ART活性は分子量4万から8万の位置に溶出された画分に検出された。
こんご、ARTの精製を進め、精製ARTの生物活性を解明する。また、ARTを持たない変異株を作製するなどして、Tの病原性への関与を検討する。

研究成果

• [文献書誌] Ehara, M.et al.: "Induction of fimbriated Vibrio cholerae O139." Clin.Diag.Labo.Immun.5. 65-69 (1998)
• [文献書誌] Yahiro, K.et al.: "Helicobacter pylorivacuolating cytotoxin binds to the 140-kDa protein in human qastric cancer cell lones,AZ-521 and AGS." Biochem.Biophys.Res.Commun.238. 629-632 (1997)
• [文献書誌] Oishi, K.et al.: "Nitrite reductase from Pseudomonas aeruginosa induces inflammatory cvtokines in cultured respiratory cells." Infect . Immun .65. 2648-2655 (1997)
• [文献書誌] Ehara, M.et al.: "Characterzation of filamentous phahes of Vibrio cholerae O139 and O1." FEMS Microbiol.Lett.152. 293-301 (1997)
• [文献書誌] Ohmori, N.et al.: "The enhancing effect of anionic α-helical peptide on cationic peptide-mediating transfection systems." Biochem.Biophys.Res.Commun.235. 726-729 (1997)
• [文献書誌] Niidome, T.et al.: "Binding of cationic α-helical peptides to plasmid DNA and their gene transfer abilities into cells." J.Biol.Chem.272. 15307-15312 (1997)