| 研究分担者 |
BALLING Rudo ドイツ哺乳類遺伝学研究所, 所長
今井 賢治 ドイツ哺乳類遺伝学研究所, 研究員
ARTZT Karen テキサス大学オースチン校, 動物学部, 教授
HRABE de Ang ドイツ哺乳類遺伝学研究所, 研究員
阿部 訓也 熊本大学, 医学部, 助教授 (40240915)
KAREN Artzt University of Texas at Austin, Professor
MARTIN Hrabe de Angelis Institute of Mammalian Genetics, GSF,Researcher
RUDOLF Balling Institute of Mammalian Genetics, GSF,Director
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| 研究概要 |
本研究ではポジショナルクローニング法とトランスジェニックマウス技術を結びつけ、巨大ゲノムDNA導入によって突然変異を機能的にレスキューする手法を確立し、これを利用して突然変異責任遺伝子を同定、単離することを目的とする。対象とするのはマウス17番染色体のt-コンプレックスにマップされる発生致死変異であるtw5変異、T変異、神経系機能に関するqk(quaking)変異、或いは9番染色体にマップされる体節・骨形成に関与するtail kinks(tk)変異である.昨年度までにBAC(細菌人工染色体)導入マウス作製技術の確立を行ない,今年度はこの手法を変異遺伝子の探索,同定,あるいは機能解析に利用した.
T変異に関してはすでに責任遺伝子が同定されており,これを含むBACを導入したところ,表現型の回復が確かに認められた.我々はtw5、tkの領域をカバーするBACコンティグを作製した.tk遺伝子座ではD9Mit9を中心とした約500kb、4種類のBACクローンでカバーされる領域に原因遺伝子が存在することを見出し、tw5ではH-2KからD17Mit148までの約1000kbのゲノム領域に原因遺伝子があり、その大半の部分をBACによってクローニングした.またこのゲノムDNA中に、糖鎖合成酵素である,αl,3-Fucosyltransferase IX(mFuc-TIX),他に機能の未知である遺伝子を複数発見した.tk領域では少なくとも6つの遺伝子が見つかっている.これまで4種のBACクローンを導入したトランスジェニックマウスを作製し、それぞれ複数の系統を樹立した.これらのマウスをtkマウスと交配し、その子孫の中からtk;BACを持つマウスを選択し,これをさらにtkマウスと交配し,実際に変異表現型がレスキューされたとの示唆を得ている.またqk変異に関しては候補遺伝子を含むBACクローンを導入したマウスを作製しqkマウスと交配し、そのFlをもう一度qk変異体と交配したところ、qkマウスの神経学的症状が回復することが確認された.
このように,BACトランスジェネシスは変異責任遺伝子の同定,機能解析に大変有効であることが実証された.
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