白血病細胞の分化により発現する新規SLAPと分化制御の解析

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09254254
• 研究機関: 自治医科大学
• 研究代表者: 畠 清彦 自治医科大学, 医学部, 助教授 (80192699)
• 研究分担者: 池田 正幸 森永乳業生物科学, 副主任研究員 ; 照井 康仁 自治医科大学, 医学部, 講師 (10285786) ; 冨塚 浩 自治医科大学, 医学部, 講師 ; 大月 哲也 自治医科大学, 医学部, 助手 (60275691)
• キーワード: 分化誘導 / retinoic acid / SLAP(Src-like adaptor protein) / アポトーシス / 内皮型IL-8

研究概要

白血病株細胞U937に、分化誘導療法のretinoic acid(RA)を曝露することによって出現する遺伝子を、differeutial display法でクローニングしたところSLAP(Src-like adaptor protein)であった。以下の点を明らかにした。
1.SLAP遺伝子を大腸菌で発現、精製し、ポリクローナル抗体を作成した。
2.SLAP遺伝子のstable transformant作成を試みたところ、核は巨大化して多核となり細胞はアポトーシスを誘導し、線維肉腫株細胞でも認められた。抗体はウエスタンで作動する系が確立できた。
3.分化誘導中にアポトーシスに陥ることから、この作用機構についても解析した。白血病細胞株自身がアポトーシス誘導因子を産生していることがわかった。精製し、蛋白のN末端アミノ酸配列分析を行い、同定した。マウスに白血病細胞を移植して、この因子を注射したところアポトーシス誘導がおこり、腫瘍も縮小した。臨床例でも解析したところinvitroでは誘導された。作用する新たな分子とSLAPとの関係についても研究が必要である。
SLAP遺伝子は全長を遺伝子導入すると、細胞がアポトーシスをおこす事から、遺伝子に変異を入れたものの樹立を試みる必要がある。現在進行中である。アポトーシスに陥る白血病株細胞は培養上清中にアポトーシスを誘導する因子が産生されており、精製したところ内皮型IL-8であると同定された。現在作用機序について研究中であり、臨床応用及びSLAPとの関係について研究を進めたい。

研究成果

• [文献書誌] Ohtsuki T, Hatake K, et al.: "Expression of Src-like adapter protein mRNA is induced by all-trans retinoic acid." Biochem.Biophys. Res.Comm.230. 81-84 (1997)
• [文献書誌] Ohya K, Hatake K, et al.: "SOCS-1/JAB/SSI-1 can bind to and suppress Tec protein-tyrosine kinase." J.Biol.Chem.272. 27178-27182 (1997)
• [文献書誌] Yamashita Y, Hatake K, et al.: "Tec and JAK2 kinases cooperate to mediate cytokine-driven activation of c-fos transcription" Blood. (in press). (1997)
• [文献書誌] Yamada M,Hatake K, et al.: "Properties of murine stroma induced by M-CSF." J.Cell Physiol.173. 1-9 (1997)
• [文献書誌] Shimura M, Hatake K, et al.: "Characterzation of room temperature induced apoptosis in HL-60." FEBS Lett.417. 379-384 (1997)
• [文献書誌] Kasahara T, Hatake K, et al.: "IL-8 and MCP-1 production by a human gliobtastoma cell line,T98G in coculture with monocytes : Requirement of mococytes-associated IL-la." Eur Cytokine Net. (in press). (1998)
• [文献書誌] Tomizuka H, Hatake, et al.: "CD95 predicts responsiveness to tretinoin in acue promyelocytic leukemia." Int J Mol Med. 1. 207-11 (1998)
• [文献書誌] Hatake, et al.: "Apoptosis-gene expression in hematopioetic system : Normal and pathological conditions." Int J Mol Med. 1. 121-129 (1998)
• [文献書誌] Terui Y, Hatake, et al.: "Rcl-X Is a Regulatory Factor of Apoptosis and Differentiation in Megakaryocytic Lineage Cells." Exp.Hematol.(in press). (1998)
• [文献書誌] Terui Y, Hatake, et al.: "Identification of a novel apoptosis-inducing factor derived from leukemic cells : Endothelial interleukin-8,but not monocyte-derived,induces apoptosis in leukemic cells." Biochem.Biophy.Res.Comm.(in press). (1998)