アポトーシスシグナル伝達機構としてのMAPキナーゼカスケードの解析

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09254264
• 研究機関: (財)癌研究会
• 研究代表者: 一條 秀憲 財団法人癌研究会, 癌研究所・生化学部, 主任研究員 (00242206)
• 研究分担者: 斉藤 正夫 財団法人癌研究会, 癌研究所・生化学部, 研究員 ; 武田 弘資 財団法人癌研究会, 癌研究所・生化学部, 研究員
• キーワード: ASK1 / アポトーシス / MAPキナーゼ

研究概要

ASK1のアポトーシスシグナル伝達機構の解析を通して、がんの発生、進展のメカニズムにおけるアポトーシスのシグナル伝達経路の関連性に関する総合的理解を得ることを目的として、本年度我々は酵母のtwo-hybrid法を用いASK1結合蛋白質の同定を試みたところ、新規のセリン/スレオニンキナーゼとともにいくつかの既知の蛋白質を得た。そのうちのひとつとしてASK1に結合するレドックス分子、チオレドキシンについて特に解析を進めた。MAPキナーゼのリン酸化反応を行うため、基質としてMKK3/MKK6、SAPK、P38、JNK、ATF-2等をGST融合蛋白質として作成したのち、発現ベクターに組み込んだASK1ならびにチオレドキシンを細胞に遺伝子導入し、この細胞を用いて複数のサイトカインや増殖因子、ストレスを作用させ、in vitroならびにin vivoにおけるkinase assayにより活性化機構ならびに、一連のMAPキナーゼファミリーの蛋白質を基質として用い検討を行った。その結果、チオレドキシンがASK1活性の阻害因子として働いていることを明らかにした。また、ASK1の抗体を作製し、胎生マウス標本を用いて免疫組織学的解析を行ったところ、ASK1が細胞死と密接に関連する組織に強く発現していることが明らかになった。

研究成果

• [文献書誌] Ichijo,H.: "Induction of apoptosis by ASK1,a mammalian MAPKKK that activates SAPK/JNK and p38 signaling pathways." Science. 275. 90-94 (1997)
• [文献書誌] Yamashita,H.: "Growth/differentiation factor-5 induces angiogenesis in vivo." Exp.Cell Res.235. 218-226 (1997)
• [文献書誌] Tobiume,K.: "Molecular cloning and characterization of the mouse apoptosis signal-regulating kinase(ASK)1." Biochem.Biophys.Res.Commun.239. 905-910 (1997)
• [文献書誌] Funato,N.: "Evidence for apoptosis signal-regulating kinase(ASK)1 in the regenerating palatal epithelium upon acute injury." Lab.Invest.(in press).
• [文献書誌] Wang,T.-H.: "Microtuble-interfering agents activate c-Jun N-terminal kinase/stress-activated kinase(JNK/SAPK)througu both ras and apoptosis signal-regulating kinase(ASK1)pathways." J.Biol.Chem.(in press).
• [文献書誌] Saitoh,M.: "Mammalian thioredoxin is a direct inhibitor of apoptosis signal-regulating kinase(ASK)1." EMBO J.(in press).