1997 年度実績報告書

有機アニオン輸送の細胞内分子機序

研究課題

研究課題/領域番号	09257241
研究機関	杏林大学
研究代表者	遠藤仁杏林大学, 医学部, 教授 (20101115)
研究分担者	細山田真杏林大学, 医学部, 助手 (00291659) 関根孝志杏林大学, 医学部, 助手 (50255402)
キーワード	近位尿細管直部 / 有機アニオン / ジカルボン酸 / トランスポーター / ジカルボン酸トランスポーター / 多選択性トランスポーター / 有機アニオントランスポーター / 交換輸送
研究概要	有機アニオントランスポーターが交換輸送体(ジカルボン酸/有機アニオン交換輸送体)であることに着目し、その対向基質であるジカルボン酸を輸送するNa^+依存性ジカルボン酸トランスポーター(rNaDC-1)をラット腎poly(A)^+RNAと共にXenopus卵母細胞に発現させることにより、p-aminohippurate(PAH)を輸送する有機アニオントランスポーター(OAT1)のクローニングに成功した。 OAT1は551アミノ酸よりなる12回膜貫通型の膜蛋白であった。ノーザンブロットでは、OAT1の発現は腎特異的であり、脳にわずかな発現を認めた。In situハイブリダイゼーションでは、OAT1は腎皮質、特にmedullary rayに強い発現を認め、OAT1のC-末端部に対して作製した特異抗体による免疫組織化学では、OAT1蛋白は近位尿細管の側底膜に限局していた。単離されたOAT1を単独で卵母細胞に発現させてもPAHの取り込みは認められるが、rNaDC-1と共発現させジカルボン酸の一つであるグルタール酸を前負荷すると、その取り込み活性は約10倍程度に増加した。またOAT1を発現した卵母細胞に^<14>C-PAHをあらかじめ取り込ませた後、OAT1の輸送基質を紬胞外に添加すると、細胞内の^<14>C-PAHが細胞外に排出されることが確認された。以上の結果はOAT1が交換輸送体であり、厳格な整流性は存在しないこと、Na^+非依存的な高親和性の輸送(Km=14.3μM)機能を有することが判明した。 OAT1の基質特異性を^<14>C-PAH取り込みに対する阻害実験、および放射能標識された基質の取り込み実験で検討した。OAT1は構造の異なる様々な薬物(βラクタム系抗生物質、利尿薬、非ステロイド性抗炎症薬、尿酸排泄薬、ACE阻害薬、抗癌薬の一部等)やプロスタグランジン、cAMP、cGMP、尿酸等の内因性物質を認識していることが確かめられた。以上より、OAT1はこれまでその存在が想定されていた基質選択性の極めて広いmultispecific organic anion transporterである事が明らかとなった。

研究成果

(8件)

すべてその他

すべて文献書誌 (8件)

[文献書誌] Kim,H.S.,Cha,S.K.,Abraham,D.G.,Cooper,A.J.L: "Intranephron distribution of cysteine S-conjugate β-lyase activity and its implication for hexachloro-1,3-butadiene-induced nephrotoxicity on rats." Arch.Toxicol.71. 131-141 (1997)
[文献書誌] Nosaka,K.,Takahashi,T.,Nishi,T.,Imaki.,H.,Suzuki,T.,Suzuki,K.,Kurokawa,K.&Endou,H.: "An adenosine deaminase inhibitor prevents puromycin aminonucleoside Nephrotoxicity" Free Radical Biol.Med.22(4). 597-605 (1997)
[文献書誌] Takeda,M.,Kobayashi,M.,Osaki,T.,Shirato,I.&Endou,H.: "Staurosporine-Induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is modulated by BCL-2 expression level" Biochem.Mol.Biol.Int.42(4). 649-656 (1997)
[文献書誌] Sekine,T.,Wananabe,N.,Hosoyamada,M.,Kanai,Y.&Endou,H.: "Expression cloning and characterization of a novel multispecific organic anion transporter." J.Biol.Chem.272(30). 18526-18529 (1997)
[文献書誌] Takeda,M.,Kobayashi,M.,Shirato,I.,Osaki,T.&Endou,H.: "Cisplatin-induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is mediated by interleukin-1β converting enzyme (ICE) family of proteases but inhibited by overexpression." Arch.Toxicol.71. 612-621 (1997)
[文献書誌] Utsunomiya-Tate,N.,Endou,H.,&Kanai,Y.: "Tissue specific variants of glutamate transporter GLT-1." FEBS Let.416. 312-316 (1997)
[文献書誌] Endou,H.,Kanai,Y.,Utsunomiya-Tate,N.&Hosoyamada,M.: "Contrib.Nephrol."Nutritional and acid-base aspects of amino acid metabolism"" Karger, 172 (1997)
[文献書誌] 長沢俊彦、河邉香月、伊藤克巳、浅野泰、遠藤仁: "Annual Review 腎臓 1998" 中外医学社, 239 (1997)

1997 年度 実績報告書

有機アニオン輸送の細胞内分子機序

研究代表者

遠藤 仁 杏林大学, 医学部, 教授 (20101115)

研究成果

[文献書誌] Kim,H.S.,Cha,S.K.,Abraham,D.G.,Cooper,A.J.L: "Intranephron distribution of cysteine S-conjugate β-lyase activity and its implication for hexachloro-1,3-butadiene-induced nephrotoxicity on rats." Arch.Toxicol.71. 131-141 (1997)

[文献書誌] Nosaka,K.,Takahashi,T.,Nishi,T.,Imaki.,H.,Suzuki,T.,Suzuki,K.,Kurokawa,K.&Endou,H.: "An adenosine deaminase inhibitor prevents puromycin aminonucleoside Nephrotoxicity" Free Radical Biol.Med.22(4). 597-605 (1997)

[文献書誌] Takeda,M.,Kobayashi,M.,Osaki,T.,Shirato,I.&Endou,H.: "Staurosporine-Induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is modulated by BCL-2 expression level" Biochem.Mol.Biol.Int.42(4). 649-656 (1997)

[文献書誌] Sekine,T.,Wananabe,N.,Hosoyamada,M.,Kanai,Y.&Endou,H.: "Expression cloning and characterization of a novel multispecific organic anion transporter." J.Biol.Chem.272(30). 18526-18529 (1997)

[文献書誌] Takeda,M.,Kobayashi,M.,Shirato,I.,Osaki,T.&Endou,H.: "Cisplatin-induced apoptosis of immortalized mouse proximal tubule cells is mediated by interleukin-1β converting enzyme (ICE) family of proteases but inhibited by overexpression." Arch.Toxicol.71. 612-621 (1997)

[文献書誌] Utsunomiya-Tate,N.,Endou,H.,&Kanai,Y.: "Tissue specific variants of glutamate transporter GLT-1." FEBS Let.416. 312-316 (1997)

[文献書誌] Endou,H.,Kanai,Y.,Utsunomiya-Tate,N.&Hosoyamada,M.: "Contrib.Nephrol."Nutritional and acid-base aspects of amino acid metabolism"" Karger, 172 (1997)

[文献書誌] 長沢俊彦、河邉香月、伊藤克巳、浅野 泰、遠藤 仁: "Annual Review 腎臓 1998" 中外医学社, 239 (1997)

1997 年度実績報告書

遠藤仁杏林大学, 医学部, 教授 (20101115)

[文献書誌] 長沢俊彦、河邉香月、伊藤克巳、浅野泰、遠藤仁: "Annual Review 腎臓 1998" 中外医学社, 239 (1997)