EBウイルスベクターを用いたエイズワクチンに関する研究

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09258201
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 今井 章介 北海道大学, 医学部, 講師 (60232592)
• 研究分担者: 高田 賢蔵 北海道大学, 医学部, 教授 (30133721)
• キーワード: EBウイルス / エイズ / ワクチン / ウイルスベクター / 免疫療法

研究概要

EBV DNAのBamHI-X断片を含むXbaI断片12.3kbpのSmaI部位へHIVのenv、rev及びネオマイシン抵抗性遺伝子(全体で6.3kbp)を挿入したプラスミドを作製した。得られたプラスミドをAkata細胞(細胞当たり約20コピーのEBVプラスミドを含む)へ電気穿孔法により導入した。G418を700mg/ml加えて培養を行い、G418抵抗性の細胞クローンを分離した。Southern blot法により相同組み換えの起こった細胞クローンを同定した。
得られた細胞に抗ヒト免疫グロブリン(Ig)抗体を加え、EBウイルス産生を誘導し、24時間後に培養上清を回収した。この上清中には組み換えEBVと共に野生株EBVが含まれる。この混合EBV液をEBV陰性Akata細胞へ感染し、薬剤選択により組み換えEBVのみが感染した細胞クローンを分離した。調べたクローンすべてで組み換えEBVのみが感染していた。
組み換えEBVを末梢血リンパ球に感染し、不死化リンパ球を得た。envの発現がWestern blot法により確認された。
今後得られた組み換えEBVを用いてHIV特異的CTLを誘導する予定である。

研究成果

• [文献書誌] Kusuhara,K.: "Breast milk is not a signifivant source for early Epstein-Barr virus or human herpesvirus 6 infection in infants:a seroepidemiologic study in 2 endemic areas of human T-cell lymphotropic virus type I in Japan." Microbiol.Immunol.41. 309-312 (1997)
• [文献書誌] Sone,S.: "Enhanced cytokine production by milk macrophages follwing infection with respiratory syncytial virus" J.Leukocyte Biol.61. 630-636 (1997)
• [文献書誌] Yoshiyama,H: "Implication of the existence of a new virus receptor different from CD21." J.Virol.71(7). 5688-5691 (1997)
• [文献書誌] Harabuchi,Y.: "Nasal T-cell lymphoma causally associated with Epstein-Barr virus." Gann Monograph on Cancer Res.45. 129-137 (1998)
• [文献書誌] Takeuchi,R.: "Respiratory syncytial virus infection of neonatal monocytes stimulates synthesis of interferon regulatory factor-1(IRF-1)and IL-1β converting enzyme(ICE)to secrete IL-1β." J.Virol.in press.
• [文献書誌] Imai,S.: "Cell-to-cell contact as an efficient mode of Epstein-Barr virus infection of diverse human epithelial cells." J.Virol.in press.