ケキシンファミリー,PACE4アイソフォームの生成機構と細胞機能制御

1997 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09267223
• 研究機関: 徳島大学
• 研究代表者: 松田 佳子 徳島大学, 工学部, 教授 (40035449)
• 研究分担者: 長浜 正巳 徳島大学, 工学部, 助手 (60281169) ; 辻 明彦 徳島大学, 工学部, 助教授 (20155360)
• キーワード: PACE4アイソフォーム / クローニング / ルシフェラーゼ活性 / 転写開始点 / SPC4 / bHLH転写因子 / Ebox

研究概要

本研究においては,PACE4Aおよび申請者らにより同定されたPACE4C,PACE4D,PACE4Eの4つよりなるPACE4アイソフォームの細胞特異的発現機構及びその生理機能の違いを解明するため,PACE4遺伝子5'-上流域の機能解析,アイソフォームの酵素学的性質,脳,内分泌器官における分布を明らかにした.特に,PACE4Cはインスリン産生との関連,PACE4Eは脳内神経ペプチド産生との関連を追求した.antisense RNAの発現系を作製し,PACE4によるペプチド産生への寄与を解析した.
PACE4遺伝子の5'-上流域をコードするDNA断片をクローニングし,プライマーエクステンション法を用いて,各種培養細胞及び各種臓器より分離したpoly(A)+RNAを鋳型として転写開始点の決定を行い,各アイソフォームの転写開始点の違いを明らかにした.
5'-上流域DNA断片をレポタ-ジーンであるルシフェラーゼ発現ベクターに組み込み,培養細胞にトランスフェクションを行い,発現したルシフェラーゼ活性を測定することにより,プロモーター領域とくにbHLH転写因子による発現調節を行うシスエレメントを同定した.

研究成果

• [文献書誌] K.Mori, Y.Matsuda, et al.: "A Novel Human PACE4 Isoform,PACE4E Is an Active Processing Protease Containing a Hydrophobic Cluster at the Carboxy Terminus" J.Biochem (Tokyo). 121. 941-948 (1997)
• [文献書誌] T.Akamatsu, Y.Matsuda, et al.: "Developmental Expression of a Novel Kexin Family Protease,PACE4E,in the Rat Olfactory System" Histochem.Cell Biol. 108. 95-103 (1997)
• [文献書誌] A.Tsuji, Y.Matsuda, et al.: "Genomic Organization and Alternative Splicing of Human PACE4 (SPC4),Kexin-Like Processing Endoprotease" J.Biochem (Tokyo). 122. 438-452 (1997)
• [文献書誌] H.Nagamune, Y.Matsuda, et al.: "Cyclic AMP-inducible Procalcitonin Processing in Thyroidal Parafollicular Cells Is Regulated by the Kexin-family Protease,PC1" Medical Aspects of Proteases and Protease Inhibitors IOS Press,Amsterdam. 22-23 (1997)
• [文献書誌] 松田佳子, 辻明彦: "前駆体蛋白質の活性化とケキシンファミリー,プロセシングプロテアーゼ" 蛋白質核酸酵素. 42. 2355-2361 (1997)
• [文献書誌] A.Tsuji, Y.Matsuda, et al.: "Gene Organization and Alternative Splicing of Human PACE4,Subtilisin-like Proprotein Convertase" FASEB.J.11. A1224 (1997)