1997 年度実績報告書

tRNAの活性発現にかかわる機能構造の研究

研究課題

研究課題/領域番号	09278226
研究機関	山形大学
研究代表者	長谷川典巳山形大学, 理学部, 教授 (60095023)
キーワード	tRNA / ミトコンドリア / 脳筋症 / 遺伝子異常 / ロイシン / クローニング / PCR / T7RNAポリメラーゼ
研究概要	脳筋症(MELAS)患者のミトコンドリア由来ロイシンtRNA(アンチコドンUUR)の構造と活性についての研究を行うにあたり、まず正常なヒトミトコンドリアロイシンtRNAとMELAS由来の変異体の構造遺伝子を含み、その上流にファージT7RNAポリメラーゼのプロモーターを有する遺伝子断片を合成した。各断片をライゲーション後、pUC19プラスミドにクローニングし、得られたクローンをDNAの配列決定により確認した。EcoRI/BamHIサイトを含む両末端に相補的なプライマーを用いて、PCR反応でこれらのプラスミドあるいはプラスミド断片を増幅された。これらのDNAを鋳型として、精製したファージT7RNAプリメラーゼによる試験管内転写反応で、正常および変異したロイシンTrnaを作成することができた。現在、大腸菌からのロイシル-tRNA合成酵素、およびウシ肝からミトコンドリアを単離し、ロイシル-tRNA合成酵素を含むアミノアシル-tRNA合成酵素標品の調製を行っており、近く活性の測定を行える見通しである。

[文献書誌] Nameki,N., Hasegawa,T.: "Recognition of tRNA^<Gly> by three widely diverged glycyl-tRNA synthetase." Journal of Molecular Bioligy. 268・2. 640-647 (1997)
[文献書誌] Tamura,K., Hasegawa,T.: "Role of the CCA end of tRNA and its vicinity in aminoacylation." Nucleic Acids Symposium Series. 37. 133-134 (1997)
[文献書誌] Nameki,N., Hasegawa,T.: "Recognition of tRNA^<Gly> by three widely diverged glycyl-tRNA synthetase evolution of tRNA recongnition" Nucleic Acids Symposium Series. 37. 123-124 (1997)