感染細胞内でそのアンチセンス機能を発揮するオリゴヌクレオチドの構築と感染制御

1998 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09309011
• 研究機関: 千葉工業大学
• 研究代表者: 高久 洋 千葉工業大学, 工学部, 教授 (50101267)
• 研究分担者: 高井 和幸 千葉工業大学, 工学部, 講師 (40260848) ; 山本 直樹 東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (00094053)
• キーワード: 環状DNA / RNAキメラオリゴマー / アンチセンスDNA / センスRNA / RNase H活性 / レトロウイルス / 感染細胞 / 耐分解酵素性

研究概要

臨床実験で使用されているホスホロチオエートオリゴマーは本来のアンチセンス機構とは異なる作用をすることが明らかとなり、本研究ではこの問題点を解決すべく新しい概念、すなわちウイルスが感染した細胞内でその機能をはじめて発揮するオリゴヌクレオチドを考案した。このオリゴマーはダンベル型DNA/RNAキメラオリゴマーでRNase H酵素により、RNA分子が切断された後に、遊離DNAアンチセンスオリゴマーが標的となるウィルスmRNAに結合してウイルスタンパク質の合成を阻害する。
前年度までに環状ダンベルRNA/DNAキメラオリゴマーが期待通りの作用機序、すなわち細胞内でRNase HによりRNA側が切断され、アンチセンスDNAが産生し、標的となるmRNAへと結合することが明らかにされた。本年度はダンベル型オリゴマーのループ部位をエトキシアルキル基に変換することでより分解耐性を高めることができた。また、当オリゴマーは一本鎖のアンチセンスオリゴマーより高い細胞導入機能を有することがわかった。現在、これらのオリゴマーを用いてヒトTリンパ球細胞系で抗HIV活性を評価中である。

研究成果

• [文献書誌] Takayuki Abe: "Specific inhibition of influenza virus RNA polymerase and nucleoprotein genes expression by circular dumbbell RNA/DNA chimeric oligonucleotides containing antisense phosphodiester oligonucleotides." FEBS Lett.425. 91-96 (1998)
• [文献書誌] Hidefumi Yamakawa: "Properties of nicked and circular dumbbell RNA/DNA chimeric oligonucleo-tides containing antisense phosphodiester oligodeoxynucleotides." Bioorganic & Medicinal Chem.6. 1025-1038 (1998)
• [文献書誌] Takayuki Abe: "Inhibition of influenza virus A RNA polymerase genes expression by phosphorothioate and liposomally endocapsulated oligonucleotides." Nucleosides and Nucleotides. 17. 471-478 (1998)
• [文献書誌] Toshifumi Hatta: "Inhibition of influenza virus RNA polymerase by 5′-capped short RNA fragments." Biochem.Biophys.Res.Commun.249. 103-106 (1998)
• [文献書誌] Kaoru Ushijima: "Site specific cleavage of tRNA -by imidazole and/or primary amine groups bound at the 5′-end oligodeoxyribonucleotides." Biochim.Biophys.Acta.1379. 217-223 (1998)
• [文献書誌] Takayuki Abe: "Specific inhibition of influenza virus RNA polymerase and nucleoprotein genes expression by phosphorothioate and liposomally endocapsulated oligonucleotides." Antiviral Chem.Chemotherapy. 9. 253-262 (1998)