1997 年度実績報告書

新しい修飾核酸の合成とその人工RNA制限酵素創製への応用

研究課題

研究課題/領域番号	09450337
研究種目	基盤研究(B)
研究機関	群馬大学
研究代表者	沢井宏明群馬大学, 工学部, 教授 (70012648)
研究分担者	尾崎広明群馬大学, 工学部, 助手 (90211820)
キーワード	DNA / 修飾核酸 / 2'-デオキシウリジン誘導体 / 標識化 / アンチセンス核酸 / RNA分解活性
研究概要	新しい修飾核酸の鍵化合物となる5位置換ウリヂン誘導体(1)をアラビノース、シアンアミド、臭化フマル酸ジメチルより簡便な操作での大量合成法を確立した。1より5位に活性なシアノメチルエステルを導入した5位置換ウリヂン誘導体(2)とした。2は活性なシアノメチル基を持つが室温で長期間保存可能であり、DNA合成条件下では分解しないことを確認した。2を定法により、アミダイト化した誘導体および市販のモノマーより、DNA合成機を用いて、癌遺伝子あるいはエイズ遺伝子に相補的な配列を持ち、所定の位置のチミヂンの代わりに2を導入したアンチセンスDNA15-20量体を合成した。この際、オリゴDNAとしてホスホロチオエ-ト結合及び天然型のホスホヂエステル結合のものを合成した。2を組み込んだDNAが固相担体で結合した状態で、ヒスタミン、チラミンなどの機能性基を持つモノアミン類、ジアミン類、ポリアミン類など種々のアミン類と穏和な条件で反応することにより、機能性基を導入した修飾DNAを簡便な操作で多種、一気に合成出来ることを明らかにした。これらDNAは高速液体クロマトグラフィーで分離精製後、酵素分解反応あるいはイオンスプレー質量分析機で機能性分子が完全に導入されていることを確認した。これら合成した修飾DNAのうち、ジアミン、ポリアミンあるいはインターカレター分子を導入したものはターゲットとなるDNAあるいはRNAと高い結合能力を有することを明らかにした。また、チラミンを導入したDNAに放射性ヨウ素(I-125)による標識化を行い、新規な標識化DNAプローブとしてターゲット核酸の検出に有用であることを示した。さらに、癌遺伝子N-Mycに相補的で、キレート化剤であるEDTAを導入した修飾DNA合成した。

研究成果
(5件)

すべてその他

すべて文献書誌 (5件)

[文献書誌] H.Ozaki, N.Iwase, H.Sawai, T.Kodama and Y.Kyogoku:"Detection of DNA Bending in a DNA-PAP Protein Complex by Fluorescence Resonanve Energy Transfer." Biochem.Biophys.Res.Commun.231. 553-556 (1997)
[文献書誌] H.Sawai, T.Itoh, K.Kokaji and K.Shinozuka: "An approach to Prebiotic Synthesis of a-Oligoribonucleotides and Description of Their Properties.Selective Advantages of b-RNA over a-RNA." J.Mol.Evol.45. 209-215 (1997)
[文献書誌] S.Kohgo, A.Umeda, H.Ozaki, K.Shinozuka and H.Sawai,: "Synthesis of Oligodeoxyribonucleotide Containing Novel C-5 reactive 2'-deoxyuridine Derivative and Its functional Modification via post-Synthetic Technique." Nucleic Acids Sp.Ser.37. 29-30 (1997)
[文献書誌] K.Shinozuka, T.Okamoto, M.Matsukura, H.Sawai,: "Synthesis and anti-HIV Activity of APhosphorthioate Antisense DNA Containing C-5 Polyamine Substituted 2'-Deoxyuridine and/or Acridine Residues." Nucleic Acids Sp.Ser.37. 215-216 (1997)
[文献書誌] H.Ozaki, Y.Ogawa, M.Mine, H.Sawai: "Effect of Acridine with Various Linker Arms Attached to the C-5 Position of Pyrimidine Nucleoside on the Stability o the DNA duplexes." Nucleosides and Nucleotides. (in press).

1997 年度 実績報告書

新しい修飾核酸の合成とその人工RNA制限酵素創製への応用

研究代表者

沢井 宏明 群馬大学, 工学部, 教授 (70012648)

研究成果

[文献書誌] H.Ozaki, N.Iwase, H.Sawai, T.Kodama and Y.Kyogoku:"Detection of DNA Bending in a DNA-PAP Protein Complex by Fluorescence Resonanve Energy Transfer." Biochem.Biophys.Res.Commun.231. 553-556 (1997)

[文献書誌] H.Sawai, T.Itoh, K.Kokaji and K.Shinozuka: "An approach to Prebiotic Synthesis of a-Oligoribonucleotides and Description of Their Properties.Selective Advantages of b-RNA over a-RNA." J.Mol.Evol.45. 209-215 (1997)

[文献書誌] S.Kohgo, A.Umeda, H.Ozaki, K.Shinozuka and H.Sawai,: "Synthesis of Oligodeoxyribonucleotide Containing Novel C-5 reactive 2'-deoxyuridine Derivative and Its functional Modification via post-Synthetic Technique." Nucleic Acids Sp.Ser.37. 29-30 (1997)

[文献書誌] K.Shinozuka, T.Okamoto, M.Matsukura, H.Sawai,: "Synthesis and anti-HIV Activity of APhosphorthioate Antisense DNA Containing C-5 Polyamine Substituted 2'-Deoxyuridine and/or Acridine Residues." Nucleic Acids Sp.Ser.37. 215-216 (1997)

[文献書誌] H.Ozaki, Y.Ogawa, M.Mine, H.Sawai: "Effect of Acridine with Various Linker Arms Attached to the C-5 Position of Pyrimidine Nucleoside on the Stability o the DNA duplexes." Nucleosides and Nucleotides. (in press).

1997 年度実績報告書

沢井宏明群馬大学, 工学部, 教授 (70012648)