DNA転写調節因子を介する小胞体膜合成制御機構の解明

1999 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 09470005
• 研究機関: 関西医科大学
• 研究代表者: 金村 秦輔 関西医科大学, 医学部, 教授 (50027091)
• 研究分担者: 高森 康晴 関西医科大学, 医学部, 助手 (50309233) ; 仁平 美果 関西医科大学, 医学部, 助手 (20274194) ; 渡辺 淳 関西医科大学, 医学部, 助教授 (40148557) ; 門藤 裕子 関西医科大学, 医学部, 助手 (30309249)
• キーワード: CYP2B2 / acyltransferase / 小胞体膜 / Phenobarbital / mRNA / in situ hybridization / luminessence

研究概要

1)肝細胞glycerophosphate acyltransferase(GAT)c-DNA低ホモロジー領域nucleotideに相補的なprobeを人工合成し、このprobeを用いてphenobarbital(PB)80mg/kg投与ラット肝細胞におけるGATm-RNA発現量を測定した結果、PB投与によってGATの転写が活性化することが明らかとなった。この結果は計量形態学的手法を用いて算出した小胞体膜表面積(小胞体量)および小胞体マーカー蛋白GRP78の増加とほぼ比例しており、PBによるGAT転写の活性化と小胞体増生の間に密接な関係が存在することが明らかとなった。(交付申請書記載の研究実施計画5および6項に対応)
2)肝細胞genomic DNAライブラリを用いたGAT DNA5'flanking領域のヌクレオチド配列を完全決定するには至らなかったが、判明したヌクレオチド断片を調べた限りでは、PBRE配列は検出されなかった(交付申請書記載の研究実施計画7および8項に対応)
3)肝細胞におけるCYP1A1/2DNA転写調節因子の細胞内局在および薬物刺激後の核への移行経路を、本研究で開発した高感度免疫組織化学法および高感度ISH法を用いて調べ、CYP1A1/2の転写調節因子AhRとArntおよび細胞質におけるAhRのパートナー蛋白HSP90の細胞内動態を解明し、初年度に得られたAhRとArntの会合・解離部位が核であることに加えて、AhRとHSP90の解離部位が細胞質であることを明らかにした。(交付申請書記載の研究実施計画2,3,4,9および11項に対応)

研究成果

• [文献書誌] Watanabe, J.: "Changes in the density of cytochrome P-450 2B1/2 molecules in the membrane of endoplasmic reticulum in perivenular, midzonal and periportal hepatocytes of rats after administration of phenobarbital."Acta Histochem. Cytochem.. 32. 321-326 (1999)
• [文献書誌] Watanabe, J.: "Amplification of immunostaining intensity by the peroxidase-antiperoxidase,avidin-biotin-peroxidase complex or catalyzed signal amplification method gives erroneous antigen content in sections."Acta Histochem. Cytochem.. 32. 407-413 (1999)
• [文献書誌] Kanamura, S.: "Cell Biology of cytochrome P-450 in the liver."Int. Rev. Cytol.. (in press).
• [文献書誌] Watanabe, J.: "Effect of phenobarbital on intralobular expression of CYP2B1/2 in livers of rats. Difference in the expression between signal and repetitive administrations."Biochem. Pharmacol.. (in press).
• [文献書誌] Takeda, T.: "Rifampicin suppresses hepatic CYP2E1 expression and minimizes DNA injury caused by carbon tetrachloride in perivenular hepatocytes of mice."Alchol. Clin. Exp. Res.. (in press).